结核分枝杆菌三种不同靶基因检测比较探究.pdfVIP

中国人兽共患病杂志 Chinese ofZoonoses Journal 189 结核分枝杆菌三种不同靶基因检测比较研究 糜祖煌秦玲 全球每年仍有800万结核病新病例出现，并有 裹1三种不同靶基因PCR和nPCR检谢曼敏度 约300万人死于结核病，结核病已成为单一致病菌 致死的最主要死因。对于结核病的诊断，一般常根据 l临床表现、x线检查、直接镜检以及细菌培养等传统 方法，这些方法敏感性低、特异性差，麻烦费时，常延 误治疗时机。近年来，灵敏、特异、简便的基于PCR 的分子诊断技术用于结核病诊断已显示出优越性。 自1989年以来基于PCR的结核分枝杆菌(Mtb)报 道众多，尚缺乏系统评介。本文对插入序列(IS)、 RNA聚合酶口亚基(rpoB)、65kDa抗原(groEL)等 MtbH37RA-DNA约为一个茁体染色体DNA 洼5fg 三种不同靶基因的基因扩增法进行灵敏度、特异性 衰2三种不同靶基因nPCR特异性试验 评介。 nPCR靶基因 1材料与方法 分类 苗种 IS rpoBgroEL 1．1 结核分枝杆菌标准株和非结核分枝杆菌标准 株来源 由北京市结核病与胸部肿瘤研究所提供。 杆菌 MtuberculosisH37RA+ o 0 一 复合 M．afYicanum+ 1．2 IS基因检测 以Molk等报道的INSl和 群 M·boris + INS2为外套PCR引物；pt3和pt6为内套PCR引 卡介苗 M．^oviaBCG+ o 0 IS基因的外 M，asiaticum 物。按原文献报道的参数分别建立Mtb M．avium — 套PCR和内套PCR扩增体系；并将外套PCR扩增 Mchelonei 一 产物用H。O作10倍稀释后作为内套PCR用模板， 肛diruhoJeri e 一 M．duvalti 一 。L 由此而构建MtbIS基因的套式PCR(nestedPCR， * M．fort㈣it —o M．gastrii 一 9 nPCR)扩增检测。 一 一 锗 M．gwa㈣ 1．3 B基因检测 以whelen