组合突变提高甲基对硫磷水解酶MPH热稳定性的研究.pdfVIP

中国农业科技导报，2015，17(1)：167-172 JournalofAgricultural ScienceandTechnology 组合突变提高 甲基对硫磷水解酶 MPH热稳定性的研究 罗晓亮 ， 顾杏露 ， 田 健 ， 初晓宇 ， 伍宁丰 (1．中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081；2．扬州大学生物科学与技术学院，江苏 扬州 225009) 摘 要：来源于苍白杆菌 Ochrobactrumsp．M231的甲基对硫磷水解酶 MPH．Och具有优 良的催化水解甲基对 硫磷农药的能力，针对其热稳定性较差的缺点，通过组合3种提高蛋白热稳定性的突变策略，最终获得热稳定 性改良的突变酶MPHM7，其 达到 65~C，在之前研究热稳定性提高的四点突变酶 (S274Q／T183E／K197L／ $192M)的基础上又提高了5~C。同时，该突变酶的催化效率也获得了一定的提高，其 ／Km值是四点突变酶 的3．8倍。热稳定性改良突变酶的获得证实了这些提高热稳定性的方法是有效的，并且其作用具有加合性 ， 这为分子设计改良酶蛋白热稳定性提供了新的研究思路。 关键词：甲基对硫磷水解酶；热稳定性；组合突变 doi：10．13304／j．nykjdb．2014．734 中图分类号：Q935 文献标识码：A 文章编号：1008—0864(2015)01—0167—06 StudiesonEnhancingThermostabilityofM ethylParathion HydrolasebyCombinatorialM utagenesis LUOXiao—liang ，GU Xing．1u ，TIANJian ，CHUXiaoyu ，WUNing-feng (1．BiotechnologyResearchInstitute，ChineseAcademyofAgncuhura／Sciences，Bering100081； 2．CollegeofBioscienceandBiotechnology，YangzhouUniversity，JiangsuYangzhou225009，China) Abstract：Themethylparathionhydrolase(MPH—Och)fromOchrobactrumsp．M231exhibitsbettercatalyticactivity thanotherMPHs．In ordertoincreaseenzymethermostability，3differentstrategieswereused withcombinatorial mutagenesis．Asaresult，the ofthemutantenzymeMPHM7wasapproximately65~C．Thetemperaturewas5~C higherthanthatofMPHM4，themutantwith4pointmutations(S274Q／T183E／K197L／$192M)．Attllesametime， thecatalyticcapacity(n／ )ofMPHM7wasupto3．8一foldofMPHM4．Thesuccessofthesedesignmethodoloyg forMPH suggestedthatitwasanefficientstrategyofrenhancingthermostabilityandithadadditivityproperty．This studyhadprovidedanew thoughtofrmoleculardesigningtoimproveenzymeproteinthermostability． Keywords：mehtylparahtionhydrolase；thermostability；combinatorialmutagenesis 有机磷农药可以破坏乙酰胆碱酯酶的活性， 目前国际上对于 甲基对硫磷水解酶的研究还 从而引发一系列神经 中毒症状，甚至导致死 处于起步阶段，它们大都是在中国发