加压毛细管电色谱在中药黄柏分析上方法学研究.pdfVIP

第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 P．C003 加压毛细管电色谱在中药黄柏分析上的方法学研究 吴漪，谷雪，王彦，闫超 上海交通大学药学院，上海，200240 关键词：加压毛细管电色谱，pCEC，黄柏，电压 一．_I__‘_-·L 1 目IJ吾 毛细管电色谱(capillary ll】，结合了高效液相色谱与毛细管电泳的双重优势，具有高柱效、高选择性、高精度、快速分离以 及溶剂和样品用量极少等优点，而加压毛细管电色谱(pressurizedcapillary pCEC)则能解决其中的气泡、定量进样和梯度洗脱的问题【2】。 黄柏含有多种物质，目前多是用HPLC对其药效物质基础及指纹图谱的研究p．4l。在本研究中将 用pCEC用于黄柏指纹图谱的研究，为黄柏指纹图谱的研究提供新的思路和方法，而且还可以为以 后的二维联用技术奠定基础。 2实验部分 TM．2100(Unimicro 仪器与试剂：加压毛细管色谱仪：Trisep cm(有效长度25cm)×150岬i．d．，5Ixm， Pleasanton，CA，USA)；色谱柱：C18毛细管色谱柱(50 inmol／L mmol／L 苏州环球色谱有限公司，苏州)。流动相：A：20 NH4Cl溶液．乙腈(95：5)，B：20 min，0—5％B；5～30min，5～20％B：30一40rain， NH4CI溶液．乙腈(5：95)，洗脱梯度：0～5 20～35％B；40一55rain，35～50％B；55—65rain，50～80％B。检测波长：230nm。柱上线性 流速：1．3 mm／s。分流比：500：l。进样量：l儿。 3结果与讨论 3．1提取条件的研究 经比较确定的提取条件为取黄柏粉末0．1g，置于10mL容量瓶中，加入10mL提取溶剂提取过 夜，再超声30 min，经0．22岬滤膜过滤即得，备用。 3．2分析条件的研究 mmol／L 经比较有机相组成比例及盐浓度比较选择的流动相为A：20 Nit4Cl溶液．乙腈(95：5)， B：20 min，5～20％ mmol／L rain，0～5％B；5～30 NH4CI溶液．乙腈(5：95)，洗脱梯度：0～5 B；30一40min，20～35％B：40～55rain，35—50％B：55～65min，50～80％B。比较多种检测 波长的比较确定为230ilm。此条件下的样品与标准品的图谱如图l。 3．3施加电压的比较 比较不加电、加2、4、6、8、10、12、14kV电压，电渗流随着电压的增大逐渐增大，大多数 峰都随电压的增加而保留时间变短，其分离效果也有改善，如图2，但是有几个则有不同变化，其 中巴马汀和小檗碱峰的分离度则随电压的增加先减小后增大。普通的HPLC反相色谱中，三个标准 品的出峰顺序为药根碱、巴马汀、小檗碱【5l，而在普通毛细管电泳则为小檗碱、巴马汀、药根碱【6】。 使用pCEC则能控制不同物质的保留时间。 735 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 图1黄柏样品(A)和对照品(B)的电色谱谱图 l of Fig pCECchromatograms standards(B)