氯霉素全抗原的合成与鉴定_董斌.pdfVIP

※生物工程 食品科学 2009, Vol. 30, No. 11 163 氯霉素全抗原的合成与鉴定 董 斌，袁 茵，段 涛，林月霞，田素娟* (广东药学院生命科学与生物制药学院，广东广州 510006) 摘 要：目的：为获得较高偶联率氯霉素全抗原，探索和优化碳二亚胺法(EDC)合成氯霉素(CAP)与牛血清白蛋白 (BSA)全抗原合成条件。方法：采用单因素设计，优化影响合成的主要因素：蛋白浓度、CAP与BSA的摩尔比 例、反应体系pH值，通过紫外法和三硝基苯磺酸(TNBS)法测定合成后的偶联率。 结果：EDC法合成氯霉素全抗 原较优条件为BSA浓度15mg/ml、CAP:BSA=70:1、pH7.4，可得到偶联率为15左右的氯霉素全抗原。结论：EDC 法可用于制备较高偶联率的氯霉素全抗原，以用来进行抗体制备。 关键词：氯霉素；牛血清白蛋白；碳二亚胺法；偶联 Synthesis and Identification of Complete Antigen of Chloramphenicol DONG Bin，YUAN Yin，DUAN Tao，LIN Yue-xia，TIAN Su-juan* Abstract： Key words：chloramphenicol (CPA)；bovine serum albumin (BSA)；carbodiimide method；coupling 中图分类号：S859.79 文献标识码：A 文章编号： 2，影响氯霉 氯霉素(chloramphenicol，CAP)在动物的肉、奶、 法合成时利用的是氯霉素抗原苯环上的-NO 蛋中的残留问题日益受到人们的重视，欧美等发达国家 素抗原的免疫原性；混合酸酐法操作复杂，控制条件严 已相继禁止使用。氯霉素残留检测主要是酶联免疫法 格，中间过程损失较大，且涉及到剧毒药品氯甲酸异 (ELISA)、液相质谱(LC-MS)法和气相质谱(GC-MS)法， 丁酯；戊二醛法易造成载体蛋白之间偶联；DCC法反 [1] 应体系少水，易导致载体蛋白变性。 其中ELISA法检测限为0.3μg/kg，LC-MS法、GC-MS [2] [6] 法检测限0.1μg/kg。ELISA法因具有特异性强、仪器 Kolosova等 报道了碳二亚胺(EDC)法合成氯霉素全 设备要求低和样品前处理相对简单等优点，而缺点在于 抗原，反应时间14h。采用EDC法合成利福平全抗原 [7] [8-10] 灵敏度较LC/MS、GC/MS偏低，目前只能用于现场监 、恩诺沙星 等也有报道。但该方法合成不稳定， 控和大量样品筛查。提高酶免疫分析方法的灵敏度，关 常出现合成不成功情况，原因可能在于EDC通过与羧基 键是制备出效价高、特异性强的抗体。而制备抗体的 反应形成氨基反应活性O-酰基脲中间体，如果该中间 先决条件是获得偶联率符合要求的抗原。 体不与氨基反应，则会很快水解并重新释放出羧基基 羰基二咪唑法(DCC法)、混合酸酐法、戊二醛法、 团，从而导致合成失败。加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) [3-5] 或N-羟基硫代琥珀酰亚胺(sulfo-NHS)可稳定中间产物提 重氮化法等 都可用于氯霉素全抗原的合成。但重氮化 收稿日期：2008-10-09 基金项目：广东省科技攻关计划项目(2006；广东省医学科学技术研究