四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白转基因斑马鱼模型建立.pdfVIP

2015年 2月 中国实验动物学报 February2015 第 23卷 第 1期 ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA Vol23 NO．1 研究报告 石 # 四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋 白 转基因斑马鱼模型建立 张力 ，刘超 ，周昕 ，谢英 ，刘树锋 ，徐增年h (1．河北医科大学实验动物学部 ，河北省实验动物实验室 ，石家庄 050017 2．华 中科技大学 同济医学院遗传学系，武汉 430032) 【摘要】 目的 探索tet—on四环素诱导表达系统在斑马鱼体内应用策略与技术路线，构建四环素诱导肝脏特 异表达绿色荧光蛋 白的转基因斑马鱼 ，为条件 型功能基 因研 究及组织特异转基 因斑马鱼疾病模型 的建立奠定基 础 。方法 构建肝脏特异启动子 fabpl0启动 rtTA蛋 白表达的重组质粒 pfabpl0一rtTA，联合 pTRE—Tight—BI—AcGFP1 质粒转染 HeLa细胞后给予 doxycycline诱导 ，Westernblot法验证 ；pfabp10一rtTA联合 pTRE—Tight-BI—AcGFP1质粒注 射斑马鱼 1一细胞期受精卵后 ，30p~g／mLdoxycycline诱导 ，荧光筛选稳定整合个体 。结果 共转染 pfabpl0·rtTA与 pTRE—Tight—BI—AcGFP1的HeLa细胞经 1Ixg／mL浓度 doxycycline诱导培养液诱导 ，GFP表达量显著高于不加 doxy— cvcline培养液对照组 ；筛选获得 的稳定整合斑马鱼幼鱼 ，在浓度为 3O g／mLdoxycycline条件下 ，肝脏 明显有绿色 荧光表达 ，对照组幼鱼肝脏位置未有明显绿色荧光 。结论 Tet一0n四环素诱导表达系统可用于建立四环素调控斑 马鱼肝脏特异表达外源基 因；利用该技术可建立诱导肝脏表达 GFP建立转基 因斑马鱼 品系 ，为建立条件型转基 因 斑马鱼疾病模型、探索肝脏器官发生发育等研究提供 良好 的模式动物工具 。 【关键词】 斑马鱼；四环素诱导系统；肝脏；绿色荧光蛋 白 【中图分类号】Q95—33 【文献标识码】A 【文章编号】1005-4847(2015)01—0081—05 Doi：10．3969／j．issn．1005—4847．2015．01．015 Establishmentofa transgeniczebrafishm odelwith tetracycline-induced GFP expression in theliver ZHANG Li ，LIU Chao ，ZHOU Xin ，XIE Ying ，LIU Shu—feng ，XU Zeng．nian (1．HebeiKeyLabofLaboratoryAnimalScience，HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050017，China； 2．DepartmentofMedicalGenetics，Ton~iMedicalCollege；HuazhongUniversityofScienceandTechnology；Wuhan430032) 【Abstract】