抗肝炎一类新药双环醇肝癌化学预防作用及其机制研究.pdfVIP

抗肝炎一类新药双环醇肝癌化学预防作用及其机制研究 孙华刘耕陶 (中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所，北京100050) 研究背景和目的 肝细胞性肝癌(hepatocellular forResearchon 症研究中心(International Agency 及分子生物学的发展，人们对肝癌有了更深入的了解，但由于早期肝癌病人一般无明显症 状，多数患者就诊时已经为中期、晚期肝癌，而未经治疗的原发性肝癌确诊后平均生存时间 一般约4个月。近年来，以手术和介人治疗为主的肝癌综合治疗已取得了长足进展，但在手 术切除或行原位肝移植术后肝癌复发率都较高。化学预防是降低肝癌发生率和死亡率的最有 效手段之一。应用天然或合成的化学预防剂阻止或预防癌症的发生已成为新的防癌战略。 认识肿瘤的病因是进行科学的化学预防的基础。到目前为止，肝癌发生的病因还不十分 清楚。流行病学的统计资料表明，导致肝癌发生的危险因素除饮水污染、遗传因素、食品中 病原因，肝炎患者发生肝癌的危险概率是非肝炎患者的100～400倍。在日本，肝癌患者中 万乙肝患者，而中国将有120—600万乙肝患者将面临肝癌的威胁。 目前，降低肝癌的发生尚无有效的方法。由于慢性肝炎具有难治性、复发性和长期性的 特征。我们设想，若一个治慢性肝炎药长期应用，在保护肝功能、抑制肝炎病毒复制的同时 具有预防肝癌发生的作用，将对降低肝癌发生率和死亡率具有重要的意义。 基联苯，双环醇，商品名：百赛诺)是中国医学科学院药物研究所研制开发的新一代抗肝炎 药物，已在美国、欧盟等16个国家及台湾地区获准专利保护，为我国第一个拥有自主知识 产权的抗肝炎新药。临床试验结果表明，Bicyclol能显著降低慢性乙肝和慢性丙肝病人血清 DNA转阴，以及血 ALT和AST水平，恢复正常有效率约50％，兼有部分病人耶e鲰和HBV 清抗e抗体阳转，停药反跳率较低，且无明显不良反应。药理研究结果显示，Bicyclol具有 抗化学毒物引起的肝损伤、抑制乙肝病毒复制、抗肝纤维化、抑制免疫损伤引起的肝细胞凋 亡等作用。我们以前的实验结果也表明，Bicyclol能诱导人肝癌细胞的凋亡、分化，保护化 学致癌物引起的肝细胞核损伤，增强肝脏对黄曲霉毒素的解毒功能，并对化学致癌物引起的 肝癌前病变有预防作用，提示BicycM在预防肝癌的发生发展方面可能有一定的潜在价值。 本研究旨在初步观察Bicyclol的肝癌化学预防作用并对其可能的作用机制进行探讨，采 ·247· 生模型。 1材料和方法 1．1细胞株 WB—F344大鼠肝上皮细胞由中国协和医科大学中国医学科学院药物研究所药理室肿瘤 代。 1．2试验动物 ICR小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，体重25～279，雄性，5周龄，合格 证号：SCXK(京)2002—0003。饲养于GLP动物饲养室中。 1．3药品和试剂 0．5％CMC配成悬浊液；RPMI 乙基亚硝胺(DEN)购自nI山a公司。 1．4 MTr试验 培养板中，培养24h后，加入不同浓度的药物，每个药物浓度设3～4个平行孔。继续培养 72h，弃去培养液，每孑L加入0．5ms／mi 培养4h，弃去M1Tr液，每孔加DMSO 公式计算细胞存活率：细胞存活率(％)=(加药细胞OD平均值／对照细胞OD平均值)× 100％。用中效分析软件计算半数抑制浓度(I％)。 1．5集落形成实验 细胞接种后第8天，培养液中加入TPA 胞接种后24h给药，其他处理同空白对照组。每组设4个平行瓶。 1．6 3MC和TPA联合诱发的WB—F344细胞体外恶性转化实验 双层软琼脂培养，观察细胞的恶性转化程度，再一瓶用于转化细胞传代。空白对照组用 ·248· 3MC／TPA转化组。细胞在加入TPA后视细胞状态每1～3天换1次液。 1．7细胞软琼脂培养实验 细胞培养板中作为底层琼脂，底层琼脂浓度为0．6％。收集完成转化实验的WB—F344细胞， 0．3％琼脂液。于培养的第28天，显微镜下计数大于20个细胞的克隆数，并计算克隆形成 率(克隆数／104个细胞数)。 1．8二乙基亚硝胺(D