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维普资讯 影响哺乳动物卵母细胞去核 效率的因素 林涛，方南洙 (延边大学农学院 133400) 摘 要 ：影响哺乳动物卵母细胞去核效率的因素很 多。本文就显微操作工具、去核方法、卵母细胞胞质去除的 数量、细胞松弛素B (cB)的添加 以及卵母细胞体外培养时间等方面对卵母细胞去核率的影响进行了分析探讨 。 关键词 ：哺乳动物 ；去核效率；影响因素 随着克隆技术的迅速发展，各种克隆动物纷纷 1．2 去 核针 诞生 ．体细胞核移植技术 已成为当前研究领域的热 在制备去核针时，在实际操作工程 中，应该灵 门话题 。但克隆效率仍然很低 ，一般不超过 10％， 活运用 。去核针根据不同的去核方法采用不同的拉 许多技术环节还需要改进和完善 。在体细胞核移植 制方法 ，例如 ，采用吸细胞质去核时，其 {．十的特点 研究中，卵母细胞的去核是重要步骤之一 ，卵母细 是．针管不能弯曲，因该有足够 的长度 ，能确保在 胞去核是否完全，直接影响着整个克隆试验的结果。 去核时细胞质在针管 内自由的吸出；又如用切割透 卵母细胞去核不完全，就容易导致重组胚染色体非 明带方法去核时，针的特点是要有一定的细度和尖 整倍性 ，出现卵裂异常，发育受阻和胚胎早期死亡 度 ．这样才能切开透明带。 等现象。因此 ，要想提高核移植效率 ，提高卵母细 2 去核方法对卵母细胞去核率的影响 胞去核率是关键 。 2．1盲吸法 1 显微操作工具 (持卵针、去核针)对去核效 盲吸法就是在显微镜下用去核针刺破卵母细胞 率的影响 透明带，吸出极体及极体周 围部分的细胞质，达到 1．1持卵针 去核的 目的。采用盲吸法对不同动物 的卵母细胞进 持卵针是用来 固定卵母细胞 的，直接影响着去 行去核 ，其去核率也是不同的，存在着 明显 的差别 ， 核的效率。持卵针必须保持针断121处平齐 ，否则影 牛和羊的卵母细胞去核率为 65％，猪卵母细胞去核 响卵母细胞固定的准确性 。持卵针外直径一般要与 率 74％，兔卵母细胞去核率高达 92％。此种方法有 卵母细胞的直径保持一致 ，不可相差太多。外直径 点是操作迅速 、简捷 ，较少 了卵母细胞暴露在外面 过小时，卵母细胞固定不稳定 ，发生转动 ，极体的 的时间。但在去核过程中，由于第一极体的退化和 位置确定不准确 ，影响了操作速度和去核效率 ；外 漂移，改变 了极体与细胞核的相对位置 ，使染色体 径过大时，直接导致 内径 的过大 ，在 固定卵母细胞 不容易识别 ，影响了去核的效果 。另外 ，运用该方 时不容易掌握力度 ，会将卵母细胞吸入到持卵针 内。 法去核时，去核针直接刺破透明带进入细胞质 内， 因此．选择适合的持卵针才能提高去核效率。 对细胞的损伤性大，同时也破坏了细胞膜的完整性 作者简介 ：林涛 (1980一)，男 (汉族)，吉林省洮南市人 ，延边大学硕士研 究生，研 究方向：动物繁殖与生物技术。 ★通讯作者：方南洙 (A960一)，男 (朝鲜族)，教授 ，博士后 ，研究方向：动物繁殖与生物技术 。 基金项 目：振兴东北老工业基地项 目；延边州延边大学合作项 目 维普资讯 和细胞 内的微结构 ，不利于细胞的恢复 ，影响了重 左右 的切 口，再用去核针从切开的口处吸出核及附 组胚 的发育率 。