替米沙坦在损伤血管重构中的作用及其机制的探讨.pdfVIP

2007海河之滨心脏病学文章汇编 基础研究 左颈总动脉2--一3cm,远心端结扎，于动脉近心端剪开一契形切口，将球囊导管经切口插入左颈 总动脉下至腹主动脉，注入适量生理盐水充盈球囊，回拉导管至主动脉弓处，重复6次，结扎 左颈总动脉。以结扎左颈总动脉的大鼠胸腹主动脉作为对照。术后喂养方法同术前。两组大 鼠分批于术后2、8、16d处死。假手术对照组不进行血管内膜剥脱术，于喂养l周后直接处 死。快速开胸，取降主动脉、固定、脱水、透明、石腊包埋。 ． 3． 测量血管壁增生程度石腊组织切片髓染色。光镜下，用计算机图像分析系统测量大 鼠损伤动脉段外弹力板围绕面积及腔内面积。管壁面积按照外弹力板围绕面积减去腔内面积 计算。术后8d管壁面积增生比=术后8d管壁面积÷假手术对照组平均管壁面积。 4．Tunnel法测定细胞凋亡试剂由武汉博士德生物制剂公司提供。石腊组织块经切片、脱 蜡、复水后，用30ml／L11202灭活内源性辣根过氧化物酶，0．05mol／LPBS冲洗2次，蛋 白酶K消化。用含末端脱氧核苷酸转移酶的反应液孵育1h。再次用0．05tool几PBS冲洗2次。 然后用链卵白素标记的辣根氧化物酶孵育30min．DAB／11202显色，苏木素复染，脱水，透 明，封片观察。细胞核染成棕褐色的即为凋亡阳性细胞。计算细胞凋亡率=平均阳性染色细 胞核数／所有细胞核数×100％。． 5． 免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白表达取组织切片，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精入水后， 采用免疫组化SABC法检测大鼠心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达，DAB显色，苏木素复染，脱水， 透明，封片。细胞浆染成棕黄色的即为阳性细胞。 6． 统计学处理上述观察指标采用平均数±标准差表示，显著性界值采用P≤O．05。使用 美国SPSS10．0统计分析软件进行统计分析，两组间均数采用t检验，多组间比较采用单 因素方差分析，相关性分析采用直线回归． 结果 1．动脉损伤后重塑两组内膜剥脱术后2d,动脉管壁面积与假手术对照组比较均无明显变 化．模型组术后8d及两组术后16d管壁面积与假手术对照组相比均有显著增加(见表1)．术 后8d或术后16d替米沙坦组和模型组比较，替米沙坦组管壁增生程度显著小于模型组 PO．05)．见表1． ‘， 表1普米沙坦组和模型组术后管壁面积、细胞凋亡宰及Bcl_2，『hz比值变化(z士8) 与模型组同时间段比较，。PO．05． 2．血管壁重塑中的细胞凋亡假手术对照组细胞凋亡率极低或为零。术后2d血管平滑肌细 胞有少量凋亡．术后8d，细胞凋亡率明显上升，凋亡细胞更多集中于内膜侧。替米沙坦组 细胞凋亡率明显高于模型组。术后16d两组细胞凋亡率下降，替米沙坦组仍高于模型组 (P0．05，表2)。术后8d两手术组细胞凋亡率与管壁面积增生比呈负相关(r=-O．576， PO．05)。见表1 3． 凋亡相关蛋白的表达假手术对照组中Bcl-2在管壁的各层均有表达，Bax表达较少。 替米沙坦组与对照组血管内膜剥脱术后，Bax的表达均显著性增加，以术后第8天表达最明 显。替米沙坦组与模型组血管内膜剥脱术后Bcl-2表达明显下降，替米沙坦组下降更明显。 75 基础研究 2007海河之滨心脏病学文章汇编 但两匀IBax的变化不大：从表1中可看到替米沙坦组Bcl-2／Bax较模型组有显著下降。 一} 讨论 术后再狭窄是经皮腔内冠状动脉成形术(PTcA)及血管支架后主要的远期不良反应。随 着PTCA和血管内支架术的广泛应用，人们也一直未停止对防止术后再狭窄方法的探索。 术后再狭窄的一个重要机制就是血管壁增生性重塑。在此过程中，血管平滑肌细胞大量 增生，同时也出现细胞凋亡。细胞增生和细胞凋亡形成制衡关系。当细胞增生过度，细胞凋 亡不足时，血管壁细胞总量及其合成的细胞外基质构成肥厚的血管壁眩钔。尽管有报道利用 涂层支架可降低再狭窄的发生率，但人们一直试图找到有效防止血管再狭窄的口服药物。大 量的试验证明，损伤血管壁组织P勺Ang水平升高，ATl受体上调嘲。在小型哺乳类动物如大 鼠，血管内膜剥脱术后应用ACEI