大鼠眼球标本石蜡切片的制作方法.pdfVIP

维普资讯 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol2005Jun；20(3) ·359 · 大鼠眼球标本石蜡切片的制作方法 易少华，陈晓瑞，邓伟年，饶广勋 [关键词] 眼球标本 ；石蜡切片；大鼠 裂隙很少。虹膜、睫状体、巩膜静脉窦和角膜等组织结构清 [中图分类号] R361．2；R446．8 [文献标识码] B 楚。 [文章编号] 1001—7399(2005)03—0359—01 3 讨论 眼球是构造复杂、结构精细的球形体，各部组织的软硬 传统火棉胶包埋方法费时且成本高、切片厚、试剂易燃、 度悬殊，且各层次间连接性差，液体不易渗透致使制作切片 无法进行免疫组化染色。常规石蜡方法 固定、脱水，组织收 难度较高。一是组织固定不好造成球内结构分离的现象，二 缩大，切片易卷折，尤其易产生固定液性视网膜剥离，给组织 是常规乙醇脱水和二 甲苯透明等步骤使视网膜严重收缩而 学观察造成影响。国内病理技术工作者在眼球制片技术上 剥离。传统用火棉胶制片时，费时且成本高，切片不能适应 改进方法较多 ，但步骤繁琐、费时。结合以往文献报道 实际需要。笔者结合大鼠眼球组织特点，在常规方法基础上 和实践 ，笔者注意到固定液选择得当与否、脱水时间的控 进行技术改进 ，获得了满意结果。 制及脱水剂的浓度，对能否作出结构完整的眼球切片有着重 要影响。眼球标本不能像其它病理标本新鲜时可切开固定， 1 材料与方法 必须整个眼球 固定后剖切 。本固定液较为温和，组织收缩不 1．1 固定液配置 多聚甲醛 4g，冰醋酸 5ml，加入 0．1 明显，且满足免疫组化染色等新技术的需要 。固定采用了注 mol／L磷酸缓冲液至 100ml(pH7．0)。 射和浸渍相结合的方法，可使眼球 内部保持一定压力，防止 1．2 取材固定 健康普通级Wistar雄性大白鼠5只，麻醉 眼球塌陷和视网膜分离。同时加强了固定剂的渗透作用，从 后用0．9％NaC1／0．0l％肝素溶液 100ml心内灌洗2min，摘 而使球内组织迅速达到固定和脱水的目的。脱水应从低浓 取眼球(保留球后视神经 5cm)，由角巩膜缘向球 内注入少 度逐渐到无水乙醇，浓度差愈小愈好，可减少细胞收缩，保持 量固定液。投入固定液固定24h。为防止眼球变形，又能使 细胞原形，避免乙醇浓度骤升而引起视网膜脱离。切开时间 固定液渗入均匀 ，用线系紧视神经根部，把眼球悬空在 固定 不宜过早，应在初步脱水后、巩膜已较硬化时进行。本方法 液中。 要去除晶状体 ，因为其结构非常致密坚硬。我们经过多次单 1．3 脱水浸蜡 室温脱水，整个眼球依次浸入 55％、65％、 独实验，发现石蜡很难完全渗入 ，严重影响切片的完整性。 75％、85％、95％乙醇各 lh，取出眼球用锋利刀片沿视轴方 透明剂选择也非常重要，二甲苯透明会使巩膜和晶状体变 向轻柔剖切 ，小心剥离晶状体 ，然后投入 95％、100％、100％ 硬 ，组织收缩明显，硬脂酸蜡兼有透明、浸蜡双重作用，但硬 乙醇各 lh。混合石蜡 I(硬脂酸与软蜡体积比3：7)2h，混 脂酸蜡浸蜡后直接包埋在染色时易脱片，加用石蜡浸埋可避 合石蜡 Ⅱ(硬脂酸与软蜡体积比2：8)1h，软蜡 1．5h，硬蜡 免此缺点。本方法在浸蜡过程中采用熔点较低的软蜡 ，将蜡 1．5h。 温严格控制在52—54℃，因此减轻了组织收缩。此外，锋利 1．4