实体组织单细胞悬液制备方法.pdfVIP

维普资讯 · 490 · 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol2007Aug；23(4) 实体组织单细胞悬液制备方法 任兴 昌，方 黎 ，陈洪勋 关键词：实体组织；单细胞悬液；HE染色 1．2．3 机械一化学法 固定组织用清水浸泡几天后用刀切 中图分类号：R446．8；R944．17 文献标识码 ：B 成 1．00mm 的小块或用刀在组织块表面刮出薄薄的细胞团 文章编号：1001—7399(2007)04—4090—02 块。切成小块的组织加适量的EDTA溶液静置过夜，期间震 荡数次。280目筛网过滤，取滤液 ，2000r／min离心 10min 在实际工作中由于机器操作和手工操作均不能保证每 后弃上清；薄细胞团块则280目筛网过滤后，直接加入适量 张玻片的条件一致，因此到 目前为止还没有有效可靠的对照 的红细胞裂解液 ，细胞团块则280目筛网过滤 ，取滤液加入 方法，故其标准化问题 日益受到大家的重视。我们以新鲜组 适量的红细胞裂解液 ，震荡后静置 40min，转入 50ml离心 织和固定组织为标本，探讨实体组织单细胞悬液制作的具体 管中2000r／min离心 10min后弃上清。然后加适量的ED． 过程，为实现一一对照式原位玻片检测技术寻求一套全面、 TA溶液静置过夜 ，每半小时震荡 1次。后续操作同机械打 可靠的技术方法。 散法。 1 材料与方法 2 结果 1．1 标本 选择杭州市中医院l临床活检标本 ，包括新鲜组 在 HE染色切片中细胞核呈蓝色，血红细胞呈红色，细 织和固定组织，运用机械法、机械 一酶消化法、机械 一化学法 胞碎片呈淡蓝色，微生物呈蓝色 0。 来制备单细胞悬液。并将制备的单细胞悬液取少许进行HE 通过比较3种制备实体组织单细胞悬液的方法 (表 1)， 染色，常规显微镜观察，以选择最优方法。 HE染色后镜检结果表明在细胞密集度方面，机械一酶消化 1．2 方法 法效果最好 ，机械法其次 ，机械一化学法较差 ；细胞形态保存 1．2．1 机械打散法 将新鲜组织块用生理盐水 (加入 10％ 方面，3种方法的效果相似；细胞损坏度方面，机械法造成大 的肝素)洗涤，然后浸泡40min；固定组织则在清水中浸泡几 量的细胞损伤，其它方法的结果差不多；污染度方面，只有用 天后用匀浆机打散或手工磨碎。打散后的产物倒人 50ml 酶消化 一机械法制备新鲜实体组织单细胞悬液时出现了少 离心管中，2000r／min离心 10min弃上清，加人适量的红细 量的杆菌污染；血红细胞数量方面，每种方法均有血红细胞 胞裂解液，震荡后静置 40min，2000r／min离心 10min后弃 存在 ，但机械法的较多；细胞团块方面，只有用机械 一酶消化 上清。加入适量的生理盐水或PBS液冲洗后，离心弃上清 ， 法制备固定实体组织单细胞悬液时存在一部分细胞团块。 重复此步骤2～3次，沉积物加入 3倍的特制保存液，4℃保 3 讨论 存，取少许涂片进行 HE染色，封片后镜检。 1．2．2 机械 一酶消化法 将组织块用生理盐水 (加入 10％ 我们用新鲜组织和固定组织为标本 ，进行实体组织单细 的肝素)洗涤 ，然后浸泡40rain左右；固定组织用清水浸泡 胞悬液制作，为组织化学、免疫组织化学、原位杂交等实现一 几天后用刀切成 1．O0mm 的小块或用刀在组织块表面刮出 一 对照式的原位玻片检测技术寻求一套全面、可靠的技术方 薄薄的细胞团块。加入 10％福尔马林震荡后静置40min，2 案奠定了实践基础。 目前虽然新出现了一种 Medimachine 000r／min离心 10min，去上清液 ，