中草药体外抑菌实验方法的改进探索研究.pdfVIP

中药研究 中草药体外抑菌实验方法的改进探索研究 胡晓蕙1，夏捷2，徐倩1 (1。天津中医药大学中药学院，天津300193；2．天津中医药大学第二附属医院内科，天津30文so) 关键词：中草药体外抗菌；实验方法；方法改进 药物的抗菌实验在医药学上已得到广泛应用。 比较检测药物与已知抑菌药物的作用。由于中草药 其应用在中医药领域，是整理挖掘和发展中医学遗 成分复杂，即使同1种药物由于产地的不同．抑菌 产，从中草药中寻找抑菌药物，以及阐明中草药疗 圈的大小也可能有差异。目前由于还缺乏中草药抗 效机制的一种有效的方法。中药抑菌实验常应用于 菌实验敏感度的统一标准。实验室应用Kirby—Bauer 中草药的筛选，提取过程的追踪。抑菌谱效价的测 法抗生素纸片I-怍为对照实验。 定及临床药敏试验等工作中。中药的体外抑菌实 在实验中发现中草药抑菌实验结果，常常不如 验，目前的实验方法主要有：定性的琼脂扩散法、定 西药作为对照实验的结果。分析原因是，由于对照 量测定的稀释法。由于中药本身的一些特性，其实 实验的含抗生素滤纸片其抗生素已定量，如红霉素 验方法多样，敏感程度也各不相同。目前中国尚无 滤纸片每滤纸片含红霉素15斗g、丁胺卡那霉素滤纸 片每滤纸片含丁胺卡那霉素30 统一的中药体外抑菌实验方法。笔者在进行中药体 pg等。而待测的中 外抑菌实验工作的过程中．发现目前使用的各个试 草药滤纸片定量没有标准，仅为每片含药液15灿L。 验方法仍存在一些缺欠和问题，有待解决。为此对 因此在实验中．根据对照的西药抗生素含量的滤纸 上述常用的几种中药抑菌实验方法进行改进探索 片。制出待检中草药含相同含量的滤纸片。用于实 研究。具体如下。 验。由于中草药自身的特点，为了保证实验中草药 1琼脂扩散法 的含量。我们常用以下的方法进行改进。 1．1 纸片法含药滤纸片的制备将普通滤纸用 1．2加厚滤纸片或用泡沫塑料法改变目前常用 打孔器打成直径为6mm的小圆纸片．置于洁净干燥 的用1片滤纸片吸药物，贴在培养基表面的做法。 试管内，120℃干热灭菌2h后，分别浸于各种中药 由于中草药常为水煎剂，用量较大等自身的一些特 药液中过夜即可，每片含药液15¨L。菌液制备：按 点。为保证和对照实验抗生素药片的相同的药量， 照无菌操作的方法分别挑取各标准菌株受试菌的 需加厚滤纸片．以吸足待测的中草药药量或其提取 3—4个单菌落接种于其相应的液体培养基中，37℃物，或用泡沫塑料代替滤纸片，将足够药量的中草 恒温培养6～8h．当受试菌生长处于对数期时最适 药或其提取物吸附到泡沫塑料中。然后再将加厚滤 合进行抗菌实验。 纸片或用泡沫塑料放在培养基表面。37℃恒温正 实验过程：取定量的受试菌液均匀涂布于营养 置，培养18～24h，取出平板，观察抑菌圈大小并测 琼脂平板上(需根据受试菌选择不同种类的培养 定其直径121。 基，如是乙型链球菌，应选用m平板)，实验菌用量 1．3打孔法是在纸片琼脂扩散法的基础上创建 以对照平板表面菌生长能成半密集菌落为定。将均 的。取定量的受试菌液均匀涂布于相应培养基平板 匀涂菌后的平板置于37℃恒温培养箱中5min。使 表面，置于37℃恒温培养箱中5min，使表面干燥。 表面干燥，用无菌镊子将含药滤纸片贴在培养基表 也可取适量受试菌液与相应的固体培养基混合。制 面，轻压纸片确保接触良好并作好标记。37℃恒温 成含菌平板。用直径6mm的打孔器在琼脂平皿上 倒置培养18～24 打孔，孔之间要注意留有一定的间距，并挖出孔内 h．取出乎板。观察抑菌圈大小并测 定其直径。