鸡胚背根节神经细胞的分离.pdfVIP

拇 维普资讯 柑5宅 可 许 } 鹂 ； 芭 岛 左围 多 汉 、 ～ ； 的小偏平终末 出现 ；s4节则无髓纤维和 I型 后肢备用根猫 (切除一侧 L ～L、L，～S 背 复合终天增多，简单终末数减少 ，I型复合终 根节 ，保 留L 背根为备用根)五只，分别取术 末很少 。术后与术前相 比，神经元胞质内溶酶 后五天 T 一S。节段脊髓背角组织 ，匀浆、离 体、线粒体、粗面 内质网明显增多。线粒体嵴 心获得上清液、制成条件培养液后，加入鸡胚 变明显；神经胶质细胞胞突 内的胶质丝 明显 背根节神经细胞悬液培养 。于 48h时，以 l 增多。上述结果表明 ：猫脊髓半横贯损伤后结 台盼蓝染色，计数神经细胞存活率 。结果显 构上是增生与溃变 同时存在 ，但增生在损伤 示：手术 侧组神经细胞存 活率为 0．854-0． 侧 以上和 以下的节段及两侧之间有较大差 O4，而非手术侧组神经细胞存活率仅为 0．55 别 ，即损伤平面 以上及对侧半可能是来 自后 4-0．10。两者相 比有显著性差异 (PO．O1)。 根的无髓纤维和下行的投射纤维的出芽 同时 提示备用根猫脊髓背角提取液对培养 中的鸡 发生 ，而损伤平面 以下可能只有来 自后根 的 胚背根节神经元除有促进神经突起生长的作 无髓纤维出芽。 ( 用外还有明显的促神经元存活作用。 鸡胚背根节神经细胞的分离 王廷堡 一，)联合培养法的改良及其在检测神经营养 吴良芳＼，廖德阳 华西医科大学组织学研究 活性物质中的应用 兰 墨 廖德 室 成都 610041 为获取背根节神经元 ，采 阳 华西 医科 大学组 织 学研 究室 成都 用Hamburger35期来亨鸡胚 ，摘取其脊髓腰 610041 著者 已用细胞钓蛋 白带技术证明 ， 段背根节 (DRG)制成细胞悬液 ，并制备 DRG 在备用根猫脊髓背角手术侧提取液电泳带相 的HE染色石蜡切片 。测量 DRG切片上神经 对迁移率 (R)0。ll～0。12，0．45—0．48两处 元和非神经元胞体最大径后 ，参照细胞大小 蛋 白带 中含有某些神经营养活性物质 。为进 结合形态学来区分背根节细胞悬液 中的神经 一步验证该两蛋白带所含物质对神经元存活 元和非神经元成份 。用离心沉降法 (i000转 ／ 的影 响，本文用改 良的联合培养法观察手术 分，5min)和 自然沉降贴壁法 (37℃，30min) Rf0．1l一0．12、R0．45—0．48两蛋 白带对鸡 分离细胞悬液 中的神经元 。结果显示 ；DRG 胚背根节神经元存活的影响。具体方法如下： 切片上神经元与非神经元 (主要是卫星细胞) 将常规的联合培养法 (即将含某神经营养活 的胞体最大径 分别 在 6～22m与 l～4ffm 性物质的凝校小条放置于鸡胚 DRG附近进 之 间。按此大小测得 DRG细胞悬液 中神经 行联 合培养后 ，可见 DRG 的神经突起明显 元与非神经元 (主要是卫星细胞)之比约为 l 朝 向凝 佼小条 的一面生长)改为将 DRG 的 ，12左右；经离心沉降和 自然沉降贴壁后两 神经细胞悬液接种于涂有 鼠尾胶原的 24孔 者比值可增至约 lt1．6左右 。其 中神经元约 培养板孔 内，并将磨碎的凝咬小条分别加入 8O 保留，而非神经元丢失约 9O％。表明用 培养孔 内。根据神经营养活性物质可从凝忮 此技术鸡胚 DRG细胞悬液 中的大部分神经