门静脉血K—ras和p53基因突变与胃癌骨转移的关系.pdfVIP

维普资讯 · 4 ·(总484) 中医正骨2O08年7月第2o卷第 7期 门静脉血 K—ras和p53基因突变与 胃癌骨转移的关系 浙江省温州医学院附属第三医院(瑞安 325200) 陈金春 黄建武 黄建华 陈积贤 张 沽 豆长明 摘 要 目的：探讨门静脉血 K-ras、p53基因突变与胃癌骨转移的关系。方法：应用PCR-SSCP技术，对 胃癌患者的门静脉血、外 周静脉血分别进行 K-ras、p53基因检测，术后随访 1．2—3年，了解骨转移情况。结果：62例 胃癌患者外周血和门静脉血 中的p53 和K-ras突变阳性率分别为8．o6％、4．83％和38．71％、33．87％；其中11例发生了骨转移，有无骨转移 p53和K-ras突变阳性率分 别为81．82％、72．73％和 19．92％和 13．61％；剖腹后探查前或胃癌探查后 门静脉血 p53和 K-ras突变阳性率分别为 38．71％、 33，87％和56．45％、62，90％，上述指标两组间比较，差异均有统计学意义(P0．05)。结论：检测门静脉血K-ras、p53基因突变对 预测 胃癌骨转移，判断预后有重要意义。 主题词 胃癌／病因学 骨转移癌／病因学 PCR单链构象多态性 p53基因 K-ras基因 门静脉 临床研究 胃癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，病死率居恶性肿瘤 CT、发现有骨转移 11例，合计骨转移灶42个，其中脊柱22个， 之首，临床统计约50％的胃癌患者在诊断时即发生了转移u)， 上肢 12，颅骨 8个。 胃癌转移是导致 胃癌患者预后差、生存率低的主要原因。胃 1．2 DNA提取(chelex-100方法) 首先取 1IIll红细胞裂解 癌的发生发展涉及多基因、多步骤改变的复杂过程，胃癌转移 液，加 150 全血(冰冻过夜)，混匀 ，室温放置 1O分钟；10003r 的早期诊断是 目前临床面临的难题之一。目前还没有早期识 转离心3分钟，弃上清，加 PBS(pH7．4)1ml洗 2次；沉淀加 别胃癌转移的特异性指标 2【)，一般常规检查无法发现胃癌微 200 chelex-100，充分混匀；沸水浴 1O分钟，立 即冰上冷却 ； 转移灶。我们采用PCR-SSCP方法检测62例胃癌患者的门静 12000r离心3分钟，取上清备用(一2o℃保存)。 脉血、外周静脉血的K-ras、p53基因，并对其进行术后随访，以 1．3 PCR扩增 反应体系：15mM氯化镁5 、10x扩增缓冲 探讨门静脉血 K-ras、p53基因突变与骨转移之间的关系。 的dNTP5 、引物各25pmol、基因组DNA1 、去离子水适量 1 材料与方法 配制50 进行扩增。反应条件：96℃预变性7分钟，94℃下加 1．1 标 本 胃癌患者62例，其中男 53例，女9例，平均年 入TaqDNA聚合酶5U，94℃4o秒变性、55℃ 1分钟退火 ，72℃ 龄63岁，经病理组织学证实并行手术治疗 ；其中胃癌部位：A 1分钟延伸、循环35次，72℃充分延伸 7分钟。扩增产物用琼 区31例，M区16例，c区2例，MC区6例，MA区4例，MCA区 脂糖凝胶电泳，紫外光下鉴定产物质量。所用引物序列见表 3例；病理分期程度：高分化腺癌 11例，中分化腺癌21例，黏 1。 液腺癌8例 ，低分化腺癌22例；分期：I期5例 ，Ⅱ期7例，Ⅲ 1．4 SSCP 调整 PCR产物浓度，使各标本浓度相当，取8 期30例，Ⅳ期2o例。有淋巴结转移者42例，无淋巴结转移2o 产物加入等量甲酰胺，热变性后 ，立即置冰浴，加入 0．25％溴 例。采集剖腹前外周静脉血、剖腹后 胃癌探查前和探查后胃 酚蓝加样缓冲液，置6％聚丙烯酰胺凝胶 (29：1)中电泳，4℃。 癌切除前门静脉血各 5IIll，乙二胺四乙酸(EDTA)抗