免疫金银染色法测定抗中性粒细胞胞浆抗体.pdfVIP

维普资讯 2008年 7月第 2眷第 14期 ChinJModDmgApp1，Ju12008，Vo1．2，No．14 · 9 · 免疫金银染色法测定抗 中性粒细胞 胞浆抗体 张铁汉 赵永新 郑辉 王伟娟 刘晓军 许采青 【摘要】 目的 建立检测抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的免疫金银染色法，并评价其应用价值。 方法 以中性粒细胞基质片为抗原 ，以胶体金标记 的羊抗人 IgG为第二抗体 ，加银染液 ，普通光镜镜检判 断结果；用此法和间接免疫荧光法 (IIF)检测28例正常人和69例相关疾病的患者血清标本共97例。结 果 两方法的敏感性和特异性无差异 ，两法符合率为 100％。结论 免疫金银染色法可替代 IIF法 ，便于 基层单位应用。 【关键词】 抗中性粒细胞胞浆抗体；免疫金银染色；中性粒细胞 Dectectionforantineutrophilcytoplasmicantibody(ANCA)inpatientssernm withimmun幢oldsilver stainining(IGSS) ZHANGTie—han，ZHAOyong—xin，ZHENGhuieta1．DepartmentofLaboratoryMedicine， theThirdAffiliatedHospitalofXinxiangMedicalUniversity，Xinxiang453003，China 【Abstract】 Objective Toestablishanimmunogoldsilverstainining(IGSS)methodfordetectinganti- neutrophilcytoplasmicantibody(ANCA)，andtoappraisesitsapplicationvalue．Methods Taketheneutro- philicgranulocyteastheantigenandtakethegoldlabeledsheep—anti—human IgG asthesecondantibody，then addsthesilvercolouringagent，judgingtheresultsbyordinarymicroscope；thesel31．mof28normalpersonsand 69patientsofcorrelationdiseaseswereexaminedbyIGSSandindirectimmunofluorescence(IIF)．Results Thereisnoobviousdifferencesofthesensitivityandthespecificitybetweenthetwomethodsandthecoincidence rate is． 100％．Conclusion Theimmunogoldsilverstainining(IGSS)canbesubstitutedofrIIFandismore suitableofrthebasichospitals． K【eywords】 Anti—neutrophilcytoplasmicantibody(ANCA)；Immunogold—silverstaining(IGSS)； Neutrophilicgranulocyte 抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是一组系统性 1．3 胶体金溶液 由本实验室参考全国临床检验 坏死性血管炎的血清标志抗体，对血管炎的诊断、 操作规程 通过鞣酸．枸橼酸钠还原法制备直径为 分类和预后的评估均有重要意义…。但 目前常用 5Bin的胶体金溶液。 方法需高质量荧光显微镜 ，在基层推广有一定困 1．3．1 待标记蛋 白溶液的制备 将待标记蛋白羊 难。我们将免疫荧光技术i见4定 ANCA改为以中性 抗人 IgG预先于 0．005mol／LpH7．0NaC1溶液 中 粒细胞基质片为抗原的免疫金银染色法测定，取得 4℃透析过夜，以除去多余的盐离子，然后 100000g 满意的结果，现报告如下。 4℃离心