高温纤维素酶产生菌的筛选鉴定和其酶性质研究.pdfVIP

第32卷第6期 太阳能学报 V01．32。No．6 ENERGIAE 2011年6月 ACTA SOIJARlSSINICA Jun．，2011 文章编号：0254-0096(201)06-0787-05 高温纤维素酶产生菌的筛选鉴定及其酶性质研究 颜 霞，柳晓东，杨俊杰 (西北农林科技大学生命科学学院，杨凌712100) 摘要：经过富集培养，用刚果红培养基透明圈法结合滤纸条降解法进行初筛，从堆腐过程中的双孢菇培养基质中 其纤维素酶活性、滤纸酶活性和B．葡萄糖苷酶活性进行检测。3株菌中A18菌株产酶能力最强。对A18的羧甲基纤 维素酶性质进行初步研究并对其进行生理生化特征研究和分子鉴定。A18羧甲基纤维索酶的最适作用温度为60℃， 最适pH为7．0，发酵培养96h后酶活达最高。以16SrDNA序列为基础构建了相关种属菌在内的系统发育树，菌株 A18在系统发育地位上属于稀有放线菌一拟诺卡氏菌属(Nocard／ops／s)，它和其他菌株的16SrDNA序列相似性最高为 9r7％，可能为一潜在新种。A18可以利用鼠李糖、乳糖、纤维二糖、甘油和肌醇，不能利用阿拉伯糖、木糖和蔗糖作为碳 源；在pH--7．0、温度45℃时生长状况最好。菌株A18可作为高温纤维素酶的产生菌进行进一步深入研究。 关键词：纤维素酶；高温放线菌；拟诺卡氏菌；系统发育分析 中图分类号iTKSll+．4文献标识码：A O 引 言 究。通过对高温放线菌产生纤维素酶的最佳条件的 用秸秆、牛粪等培养基质培养食用菌是解决农 确定可以对实际生产进行指导，节约能源。 村固体废物问题的一个途径，具有保护环境、节约原 目前国外的一些研究者也致力于放线菌纤维素 材料和能源、投资少、运行费用低等优点…。但秸 酶的研究，现已深入到基因组的研究水平¨J。其他 秆、牛粪等含有大量木质纤维素，成分复杂，难以被 充分转化利用。因此，加强木质纤维素的生物降解 bi甚pora 成为关键。以往研究表明旧】，在食用菌培养基质的 的研究较多，而对拟诺卡氏菌的研究很少。在对双 高温发酵阶段，高的堆体温度会抑制大部分微生物 孢菇堆腐基质研究过程中，发现一株可进行高温高 的生长和活性。堆体温度应控制在45～65℃之间，效纤维素降解的稀有放线菌——拟诺卡氏菌，现将 这也是木质纤维素等大分子物质降解的最适温度， 其研究结果报告如下。 因此，研究该温度范围内的微生物活性及降解性能 1材料和方法 具有重要意义¨1。 目前用于纤维素酶生产的菌株主要有木霉、青 1．1材料 霉及曲霉等【4’51；有关放线菌纤维素酶的研究较少。 1．1．1分离材料 国内放线菌纤维素酶研究尚处于起步阶段。现在市 发酵过程中的双孢蘑菇栽培基质。 售的纤维素酶大多数是由中温菌生产的，然而这些 1．1．2培养基 酶并不适用于工业生产的高温环境中，所以嗜热微 富集培养基：用无碳培养基加入滤纸作为碳源 生物生产的热稳定纤维素酶具有重要的应用前景。 作为富集培养基。Na2HP044．09；KH2P042．09； NaCl 对于嗜热放线菌及其所产纤维素酶的研究，文献 0．59；NH4N030．59；(NH4)2S040．49； 0．49；琼脂189；水 [6]于堆肥中分离出分解纤维素的放线菌，根据其MgS04·7H200．019；K_N03 形态学和生理生化特征鉴定为高温