基于核酸适配体与银纳米粒子探针共振光散射技术检测卡那霉素.pdfVIP

基于核酸适配体与银纳米粒子探针共振光散射技术检测卡那霉素.pdf

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MVS一1旋涡混合器(北德科学仪表厂,北京)。 (二)试剂DNA序列由上海生工生物技术有 F匕 二、结果与讨论 一、当日示司-、J 限公司合成.其浓度根据260nln处的吸收来确定. (一)纳米银为探针.卡那霉素及其适配体作 其序列为:(1)5’-TGGGGGTTGAGGCTAAGCCGA一 用散射光谱 图l显示银胶与卡那霉素适配体在卡 3’(探针T1);(2)羧基荧光素(FAM)-5’一 TGGGGGTTGACrC汇TAAGCCGA-3’(探针T2):那霉素存在下表面等离子散射(RLS)光谱。通 常.当粒子暴露在高盐溶液时,由于粒子间排斥力 (3)5’一GAGGCJCAACGAGTGTTTATAGA-3’(探 TGATATTG-3’ 针R1):(4)5’_(论AATTTAATTG被屏蔽.银纳米粒子发生聚集.产生增强的RLS信 (探针R2)。 号.如图2所示。当卡那霉素适配体加到银胶中, DNA结构的可扭转性允许短的DNA片断伸展其碱 七氟丁酸、硝酸银(AgN03)、硼氢化钠 基面向银纳米粒子.导致单链DNA强烈吸附在银 (NaBrt,)和柠檬酸三钠(Na3C6H50,·2H20)购于 Sigma公司。分析纯甲醇、乙腈购买于国药集团。纳米粒子上.增加了复合物表面负电荷。使其能抵 mL 抗较高离子强度效应。而且。这种吸附不仅仅是物 磷酸盐缓冲液制备为1.36g磷酸二氢钾溶于980 理性的,还涉及碱基与粒子间的配位作用,因而, 二次水中,用1.0mol/L盐酸调至pH4.0,加入0.15 g 乙二胺四乙酸二钠和20 这种吸附能稳定银纳米粒子.表现出弱的RLS信 g三氯乙酸固体,定容至 1 000 号.如图3所示。另一方面,如果在卡那霉素存在 mL。 银纳米粒子合成依据硼氢化钠还原硝酸银的文 下。卡那霉素及其适配体作用后。适配体的构象发 献【Ⅻ。在装有40.0mL-次水洁净三角瓶中,加入 生变化。它的碱基不能有效展开,负电荷的磷酸根 0.05 mLl 骨架与银纳米粒子间产生较强的静电排斥力.导致 185.0¨Lmol/L硝酸银和3.5oA柠檬酸三 钠。混匀lmin后,在磁力搅拌和冰浴下,缓慢滴 银胶在370nm附近出现强的RLS信号,如图l所示。 ;n116.0mLO.05%硼氢化钠溶液。搅拌10min.所得 (二)纳米银为探针。卡那霉素及其适配体作 银胶浓度约为19.9 用荧光属性 当荧光标记卡那霉素适配体加到银胶 mg/L。所有其他试剂均为分析 纯。 溶液中.标记染料的荧光猝灭。而在卡那霉素存在 (三)鸡肉样品前处理和卡那霉素测定称取 下.适配体的构象发生变化,其荧光恢复,如图4 2g样品。加入lO.0mL磷酸盐缓冲液,均质2min, 所示。这种不同的荧光改变进一步表明DNA在银 16000 纳米粒子上吸附程度不同。相比较而言。单链 r/min.上清液转移至另一个50.0mL离心管, 残渣用10.0mL磷酸盐缓冲液重提1

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