猪第二极体核物质支持胚胎早期发育.pdfVIP

中围畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集 猪第二极体核物质支持胚胎早期发育 于建宁，王公金，周晓龙，徐小波，范必勤 (江苏省农业科学院畜牧研究所南京210014) 引言 由于极体不参与胚胎发育而退化，所以许多研究者认为它们是没有功能的小细胞。近年 来，由于哺乳动物核移植等技术的突破，人们发现小鼠第二极体能够支持胚胎发育，但关于 大动物的极体发育全能性相关报道不多【l’2l。本实验通过细胞核移植方法探讨猪第二极体是否 具有发育全能性，能否支持猪的早期胚胎发育，为应用极体保存母本种质基因资源、用于母 系不孕不育以及临床异常染色体遗传疾病的早期诊断等领域奠定基础。 材料与方法 从屠宰厂采集新鲜猪卵巢，收集COCs采用TCMl99进行体外成熟培养，接着采用 mTBM进行体外受精获得排出第二极体的原核胚胎，然后采用台盼蓝染色检测第二极体的活 性，并通过显微操作将第二极体与去除雌原核的原核胚进行重组，获得重组胚胎，于NCSU-23 中继续培养，观察早期胚胎发育情况。 结果 在受精后24h内，随着受精后培养时间的延长，第二极体的排出率与存活率都逐渐升高， 从4h-12h极体排出率虽逐渐升高，但均不及10％，在20h时有50．6％的受精卵排出第二极 体，其中82．2％有活性，显著高于其他各组(尸o．05)。随后在24h时，由于极体的崩解使排 出率和存活率都显著降低(尸o．05)。 将Pbll注入去除雌原核的原核胚中，同时设体外受精组为对照组。由PblI与去除雌原核 原核胚的重组胚胎中，有20．7％的能够发育到2．细胞期，7，2％发育到4．细胞期，极少数发育 到8一细胞期；另一方面，从胚胎形态看，PblI重组组发育的胚胎与体外受精组获得的胚胎没 有显著差异。 讨论 我们通过将PblI与去除雌原核的原核胚进行重组发现重构胚胎仍然能够继续发育，说明 猪Pbll同小鼠PblI一样都能够支持胚胎发育【3l，而且我们以前的实验也证明猪Pbl也能够支 持早期胚胎发育【4l。但猪Pbll重构胚卵裂率要显著低于体外受精的卵裂率，这说明去核、重 组等显微操作可能会对细胞造成一定的伤害，同时PblI由于排出时染色质处于凝集状态重组 后不易解聚，并且与精核周期不同步、不易与精核融合可能也是导致卵裂率较低的原因。另 一方面，猪PblI的去核效率不如Pbl[71，因为Pbl时期的卵母细胞中只有一个细胞核，而PblI 时的受精卵中有两个原核，这对去核操作带来很大困难。而且猪极体相对于卵母细胞十分微 小，部分受精卵排出的PblI和未退化的Pbl难以辨别，此类细胞不能用来做重组试验，使得 PbII的来源相对较少，最终导致实验结果不理想。 目前，人们对动物极体的相关研究还不够深入，尤其是大动物的极体研究更少，至今还 没有其后代出生。只有证明了猪极体的发育全能性，才能为极体的冷冻保存应用到猪母本种 质资源保存中提供理论依据与关键技术。 参考文献： f1】范必勤．哺乳动物第一和第二极体研究进展川．农业生物技术学报，2000，8(2)：103．105． ofNormalMiceAfterElectrofusionoftheSecondPolar with YL，HALL几．Birth 【2】FENG Body for theMalePronucleus：APossibleTreatment Oocyte—Factor Steril，1997， Infertility【J】．Fertil 1：116·117． Supplement ofthe derivedfromthe female 【31WakayamaT，HayashiYOguraA．Participatio