寒温并用法中药复方体内抗甲1型流感病毒的实验的研究.pdfVIP

．．392．． 寒温并用法中药复方体内抗甲1型流感病毒的实验研究◆ 王保华1李赛美1左俊岭1张奉学2吴俊宽3 (1广州中医药大学第一附属医院：2广州中医药大学热带医学研究所；3广州中医药大学 热带医学研究所中西医结合医院广州510405) 银翘柴桂汤由《伤寒论》之柴胡桂枝汤合《温病条辨》之银翘散加减组成， 具有调营卫、解表邪、清热毒的功效，临床用于治疗流行性感冒初起恶寒、发热、 头痛、肌肉酸痛、咽痛等症，疗效确切。本实验采用病毒学研究手段，通过动物 体内抗病毒实验方法，对银翘柴桂汤抗甲l(H1N1)型流感病毒FMl株感染的作 用进行实验研究，结果如下。 1实验材料 1．1实验动物 NIH小鼠，SPF级，13～159，雌雄各半，购自广东省医学实验动物中心。 相对湿度：75+10％。 1．2流感病毒 甲1型流感病毒FMl鼠肺适应株，由广州中医药大学热研所病毒室提供， 参照郭元吉方法，经小鼠增强毒力，鸡胚尿囊腔传代培养2次，测定小鼠半对数 致死量LD500 1．3实验药物 银翘柴桂汤(柴胡10克、桂枝10克、金银花15克、连翘15克等组成)， 中药饮片购自广州中医药大学第一附属医院中药房，复方水煎剂由广州中医药大 学第一附属医院制剂室制备，含生药量2∥“。根据临床等效用量，按409／kg、 209／kg、lOg／kg分设高、中、低三个剂量组。阳性对照药利巴韦林，广州白云山 天心制药有限公司生产，批号070604，规格100mg／ml。 2实验方法 2．1银翘柴桂汤对甲1型流感病毒FMl株致小鼠病毒性肺炎的影响 按《中药新药研究指南》，NIH小鼠随机分为正常对照组、病毒模型组、利 巴韦林组、银翘柴桂汤高、中、低剂量组，每组15只。银翘柴桂汤各组与利巴 韦林组小鼠于流感病毒滴鼻感染前l天开始灌胃给药，0．3ml／(只·日)，正常对 照组、病毒模型组给予同体积同频率蒸馏水灌胃。各组小鼠在乙醚轻度麻醉下， 正常对照组用50910．9％生理盐水滴鼻，另室饲养。其余各组小鼠用15LD50的流 感病毒稀释液50u．1滴鼻感染建立流感病毒感染模型。 。基金项目：国家科技部“十一五”支撑计划课题，项目编号：2006卧101800。 ．393．． 病毒感染后第5天，禁食禁水8小时，称小鼠体重；摘眼球取血，脱臼处死 小鼠，摘取全肺，肉眼观察记录病变程度；冷生理盐水洗涤两次，滤纸吸干表面 肺抑制率(病毒对照组平均肺指数一实验组平均肺指数)／病毒对照组平均肺指 数X100％)。 2．2银翘柴桂汤对甲l型流感病毒FMl株感染小鼠的死亡保护和延长生存时间作用 小鼠分组及给药同实验2．1，用5LD50的流感病毒稀释液501．tl滴鼻感染建立 流感病毒感染模型。感染后各组小鼠灌胃给药14天，逐日观察记录动物发病情 况、死亡数及死亡时间。计算死亡率(14日内死亡数／该组动物总数X100％)、死 亡保护率((模型对照组死亡率一给药组死亡率)×100)、延长生命率((给药组 平均存活日数一模型对照组平均存活日数)／模型对照组平均存活日数x100％)。 2．3统计分析 采用spssl3．0统计软件进行统计学处理，实验数据用均数-4-标准差(x士s) 表示，组间比较用单因素方差分析，死亡率用f检验。 3实验结果 3．1一般情况观察 正常对照组小鼠活动能力、毛色光泽、进食及进水量无明显变化。病毒对照 组小鼠的毛色无光泽，体重减轻，进食、进水量明显减少，活动能力下降，蜷缩， 呼吸急促；与病毒对照组相比，各用药组小鼠毛色光泽有所好转，稍蜷缩，活动 能力明显增强，进食、进水量多于前者，呼吸急促症状减轻。 3．2银翘柴桂汤对甲1型流感病毒FMl株感染小鼠肺指数的影响 与正常对照组相比，各流感病毒感染组小鼠的肺指数明显增高，有显著性差 异(PO．05)；与病毒模型组相比，利巴韦林组、银翘柴桂汤高中低各剂量组小 鼠的肺指数降低，均有显著性差异(PO．05)；银翘柴桂汤的剂量与肺指数呈负 相关，有明显的量效关系，高剂量组与利巴韦林组组间比较无显著性差异 (P0．05)。结果如表1所示。 表1银翘柴桂汤对甲1型流感病毒FMl株感染小鼠肺指数的影响 注：△与正常对照组比较P0．05，·与病毒模型组比较PO．05。 3．3银翘柴桂汤对甲1型流感病毒FMl株感染小鼠死亡保护作用影响