饲料活性赖氨酸测定方法研究进展.pdfVIP

维普资讯 饲料活性赖氨酸测定方法研究进展 邓 敦 ，谢冰梅 ，唐时花 ，邓跃林 ，王 彬 (1．广东温 氏食品集团有限公司 ，广东 新兴 527439；2 湖南省邵阳县 白仓镇中学，湖南 邵阳 422114 3．江苏食品职业技术学院，江苏 淮安 223001) 中图分类号：$816．17；$816．4 文献标识码：A 文章编号：1001—0084(2007)21—0037—03 赖氨酸 (Lysine)作为猪第一限制性氨基酸，20 O．5 世纪 50年代开始一直是动物营养学研究的热点。 由于Lys在动物饲料中用量大、成本较高，因此， 必须精确地确定动物最佳生长发育的最低需要量 。 另一方面，许多原料经过加热、加压、磨粉、碱处 理，或者贮存时间过长，均可导致 Lys的￡一氨基 与其他物质发生美拉德反应 (Mailardreaction)，形 成脱氧酮糖化合物，虽然该物质能被动物部分吸 H3N ～ C — O p 8 6 卢 收 ，但无营养价值 ，导致部分 Lys不能被动物利：N ． C ． C ． C ． C ． HC li ： pK2=9．0 0 pKl=2．2 用 。只有准确评价 Lys的有效率 ，才能合理利用 Lys，避免蛋 白质资源的缺乏和浪费，减少动物对 图 1赖氨酸的基本结构 氮的排放和环境污染。准确测定饲料和回肠末端食 糜中活性 Lys含量 ，将有利于动物对 Lys需要量的 2 活性 Lys的测定方法 研究。 2．1 1一F一2，4一二石肖基苯法(FDNB法) 1 活性 Lys(Reactivelysine)的定义 Carpenter…用 FDNB法连接 Lys残基 ，酸水解 L—Lysine(Lys)化学名称 为 ，￡一二氨基 己 之后用分光光度计测定 DNP—Lys的含量，当样品 酸， 上有不对称碳原子存在 ，已知的天然蛋 白质 中存在碳水化合物时，会生成一些不稳定化合物， 中的氨基酸都属 型，LyspKa分别为：pK。2．2， 导致过高估计活性 Lvs含量 。Holm在碳水化合物 pKz9．0，Pk 10．5(图 1)，PI=9．74，故为碱性氨 水解时，试 图使用色谱法从受到影响的氨基酸和其 基酸 。由于 ￡一氨基 比 一氨基具有较高的pKa， 他化合物中分离出DNP—LysI。Peterson等 使用高 使得 Lys侧链 的亲核性下降。特殊环境作用能够降 效液相色谱来分析活性 Lys，检测波长为 436nm， 低 Lys侧链 的pKa，使之变得活跃 。活性 Lys是指 C18毛细柱 ，20％乙腈和 80％0．01mol·L 醋酸 s一氨基能与其他物质发生反应的Lys；可利用 Lvs 盐缓冲液(pH4．O)作为流动相。该法首先应用于分 是指食人的Lys能够被动物吸收并可用于蛋白质合 析二硝基苯化棉籽蛋 白的水解产物。Catherine等… 成的Lys；可消化 Lvs是指食人的Lys经消化后被 应用上述方法未能很好地测定DNP—Lys，并得出 吸收的Lys。从实用 的角度 ，可 以把可消化 Lys和 DNP—Lys的紫外最大吸收峰(max)在 364nm，而 可利用 Lys同等对待，但活性 Lys与可消化Lys或 不是在 436nm，并对此分析方法做 了改进 ，用 可利用 Lys有着本质的区别。 20％乙腈和80％的0．01mol·L 的邻苯二甲酸氢