重组病毒AcMNPV-BmK IT侵染Sf9细胞后凋亡相关基因de表达分析.pdfVIP

艋杨保 2015．41(1)：23—27 PlantProtection 重组病毒 AcMNPV-BmK Ⅱ侵染 Sf9细胞后 凋亡相关基因的表达分析 付月君 ， 林桃桃， 梁爱华 (th西大学生物技术研究所 ，化学生物学与分子工程教育部重点实验室，太原 030006) 摘要 将从东亚钳蝎中克隆到的兴奋型昆虫毒素基 因(BmKIT)同源重组到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcM— NPV)基 因组中，得到重组病毒 AcMNPV-BmKIT，抗虫试验表明重组杆状病毒的杀虫活性明显优于野生型病毒 ， 但 AcMNPV介导的BmKIT的抗虫分子机制尚未阐明。本试验从草地贪夜蛾Sf9细胞 中克隆获得 了凋亡相关基 因sfp53，制备了抗体，分析了AcMNPV-BmKIT对Sfp53表达的影响，结果表明被重组病毒感染的细胞所表达 的Sfp53时间与表达量与野生型相比都有所提前和提高，说明重组病毒可加速细胞的凋亡；同时通过半定量PCR 分析了AcMNPV-BmKIT感染Sf9细胞时病毒抗凋亡基因iap2的表达，结果表明重组型病毒抗凋亡基因iap2表 达量减少。以上结果在细胞分子水平上解释了AcMNPV-BmKIT杀虫活性提高的原因。 关键词 AcMNPV-BmKIT； 凋亡； S 53； iap2 中图分类号： Q781 文献标识码 ： A DOI： 10．3969／j．issn．0529—1542．2015．01．004 Expressionanalysisofapoptosis-relatedgenesinSf9cells infectedbyrecombinantAcMNPV-BmK IT FuYuejun， LinTaotao， LiangAihua (InstituteofBiotechnology，KeyLaboratoryofChemicalBiologyandMolecularEngineering ofMinistryofEducation，ShanxiUniversity，Taiyuan 030006，China) Abstract W eengineeredaninsecttoxingenefrom ButhusmartensiiKarsch (BmK ITgene)intothegenomeof AcMNPV(Autographacalifi，rnicamulticapsidnucleopolyhedrovirus)inourpreviousstudy．Thebioassaydatain- dicatedthattherecombinantbaculovirusAcMNPV-BmK ITsignificantlyenhancedtheinsecticidalactivity．How— ever，nothingisknown abouttheapoptosismechanism ofAcMNPV—Bm K IT．In thisstudy，Westernblotand semi-·quantitativePCR wereusedtoanalyzetheeffectsofAcMNPV-BmK IT ontheexpressionofapoptosis·r·elat·· edgenes，sfp53andiap2．TheresultsshowedthatAcMNPV-BmK ITincreasedtheexpressionofsfp53andin· hibitedtheexpressionofiap2，whichexplainedtheenhancedinsecticidalactivityofAcMNPV-BmK IT incellular andmolecularlevels． Keywords AcMNPV-BmKIT； apoptosis； Sfp53； iap2 蝎使用其毒液作为狩猎和 自卫的武器，毒液的 体病毒(Autographacalifornicamul