黄芪注射液对L6成肌细胞抗H2O2致凋亡模型的保护.pdfVIP

Key words: L rat myoblast cells ，Astragalus injection ，H O ，Bcl-2 ，Bax ，MTT method ， 6 2 2 Flow cytometry 黄芪又称为黄耆是豆科多年生草本植物，是著名的常用滋补中药材，有蒙古黄芪 Astragalus membrananceus( Fisch·) Bge·var·mongholicus(Bge·) Hsiao 和膜荚黄芪 A·membranaceus(Fisch·) Bge·2 种，药用价值以蒙古黄芪为好。黄芪总黄酮( total flavonoids of Astragalus，TFA)是从蒙古黄芪中分离的抗氧化清除自由基的主要活性成分， 一系列研究表明 TFA 具有抗损伤、抗突变、抗肿瘤和抑制动脉粥样硬化等多种生物学效应[1， 2] 。 分离黄芪，初步提取得到黄芪总黄酮(TFA)、黄芪总皂苷( total saponins ofAstragalus, TSA)和黄芪总多糖( total polysaccharide of Astragalus，TPA)共3 种成分。TFA 中主要 含有 6 种单体化合物，其中 4 种为异黄酮类化合物。它们分别是：β-谷甾醇、芒柄花素、 毛蕊异黄酮、β-谷甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷、芒柄花素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和毛蕊异 黄 酮 -7-O- β -D- 吡 喃 葡 萄 糖 苷 [3] 。 黄芪总黄酮（TFA）[4]可以使免疫细胞内 cAMP 升高，激活磷酸化酶，促进糖原分解，为 吞噬细胞的免疫应答提供能量，可以促进淋巴细胞的转化，提高中性粒细胞的吞噬功能。TFA 对 O-·2 自由基的清除作用最强，能直接清除超氧阴离子自由基 O-·2 和羟自由基(·OH)， 多途径阻断自由基链式反应，有效的防止活性氧所致的细胞膜损伤。TFA 具有较强的清除自 由基作用，TFA 可通过抑制肿瘤细胞的增殖达到治疗肿瘤的目的。而 TFA 对紫外线损伤的防 护功效也主要源于对自由基的清除作用。 H O 是有机体氧化代谢的产物，同时是一种活性氧。氧化作用很强，可由超氧阴离子自 2 2 发岐化生成，并能进一步生成羟自由基。H O 很易穿透细胞膜到达细胞内位点。也可直接作 2 2 用于膜脂质，形成脂质过氧化物，导致细胞膜的损伤，而且还可通过脂质过氧化物分解代谢 产物丙二醛(MDA)，促使蛋白质交联聚合反应引起细胞损伤[5] 。 本实验旨在通过对损伤细胞株模型的建立，摸索黄芪中成药物促进大鼠成肌细胞生长修 复过氧化氢损伤的作用机制。本实验的意义在于研究黄芪注射液能否加强对肌肉创伤给予积 3 极的防治。 1 材料和方法 1.1 实验材料 由中国科学院细胞库提供的 L 大鼠成肌细胞株（L rat myoblast cell）购于中国科学 6 6 院上海生命科学研究院细胞资源中心。 1.2 主要试剂与仪器 1.2.1 主要试剂：胰蛋白酶（ Trypsin）和 DMEM 培养基(Dulbeccos Modified Eagel Medium）购于 Invitrogen Corporation；胎牛血清（Fetal bovine serum）购于杭州四季 青生物技术有限公司；青霉素（ Penicillin G sodium salt）、链霉素（Streptomycin sulfate）、DAPI(4’-6-二脒基-2 苯吲哚)、RNase、PI（ propidium iodide）均购于 Sigma 公司；Bax、Bcl-2 抗体均购自 Boster公司。 1.2.2