灰毡毛忍冬中五环三萜类化合物的抗氧化活性研究.pdfVIP

≈燕 …牌1篙麓粼篇：翥霪罴篇篇篓蒜讨会纂藤2012海峡两岸譬CSNR全萄第lO蕃中药及天然药勒资源学术研讨会灞霸嬲黪 越来越多的科学研究证实自由基是人体疾病和衰老的直接制造者，人寿命的长短与自由基的 产生及人体内抗氧化剂的浓度有着密切的关联…。然而研究发现，合成的抗氧化剂对人体具有潜在 的威胁【241，因此，研究开发广谱、高效、安全的天然抗氧化剂己成为当今研究的热点之一。 灰毡毛忍冬仨D胛fce阳朋口c朋玎历Df沈s)为忍冬科忍冬属植物，产于我国大部分地区。其花、茎叶 均可入药，中医临床及民间广泛应用于温病发热，热毒血痢，痈肿疮疡，风湿热痹，关节红肿热 痛等病症，并具有清热解毒，疏风通络之功效【5】，为西南地区常用中药。其花蕾作为新增品种收载 于中国药典2005年版山银花项下。张伟敏等【6J对灰毡毛忍冬花蕾提取纯化物进行了体外抗氧化活 性研究，发现灰毡毛忍冬花蕾提取物对几种自由基均有不同程度的清除作用，且对羟自由基的清 除能力以及对Fe3+的还原能力均要明显强于抗坏血酸，具有潜在的抗氧化活性。本课题组前期研 究【7]发现，灰毡毛忍冬茎叶4种溶剂提取物对DPPH自由基和Fe3+还原力也有较强的作用，其中正 丁醇提取物的作用效果最好。但尚未有国内外文献报道灰毡毛忍冬五环三萜类化合物的的抗氧化 活性。因此，为了进一步开发利用灰毡毛忍冬的植物资源，本文分别运用1，1一二苯基一2．苦味偕腙 肼自由基(DPPH·)法和Fenton法对灰毡毛忍冬中23个五环三萜及其皂苷进行体外抗氧化能力评价。 为灰毡毛忍冬更广泛应用于医药和开发新型保健品提供参考。 1材料、试剂与仪器 1．1材料 灰毡毛忍冬于2009年6月采自湖南隆回县，经江苏省中国科学院植物研究所袁昌齐研究员鉴 定，标本现存放于江苏省中国科学院植物研究所药用植物研究开发中心。(余略) 1．2仪器(略) 1．3试剂(略) 2方法 2．1清除DPPH自由基[8Ⅲ】 称取灰毡毛忍冬不同极性成分及其五环三萜皂苷单体若干用DMSO溶解，分别配制成2 m mg／mL或2mmol／L的母液。DPPH用无水乙醇配制成0．16mol／L，置于棕色瓶中备用。在干净 mmol／L的DPPH，20 96孔板中，每孔分别加入100此0．16 pL不同浓度的样品溶液，80止蒸馏 17 水，混匀。在25℃条件下反应15min后，将96孔板放入酶标仪中于5nm波长处检测样品吸光 得样品本底吸光度(A；)。每个检测做4个重复，取其平均值。清除率计算公式如下： 清除率脱=丝!二丝二趔×100 彳D 2．2对羟自由基f。OH)的清除作用【l纠 向干净的96孔板中分别加入浓度为2mg／mL的灰毡毛忍冬不同极性溶剂提取物溶液或 入6 50 min后，再向其中加入 mmoM，的FeS04溶液50此，6mmol／L的H202pL，摇匀，静置10 6mmol／L的水杨酸溶液50此，混匀。在37℃条件下反应30min后将96孔板放入酶标仪中于510 中的水杨酸，测得样品本底吸光值(A)。每个检测做4个重复，取其平均值。按下面公式计算清除 率： 镶蔗 舅1叩嵩器裟裂萎美糕篡蒸爹藉讨会满熏2012海峡两津置cSNR全国第，O屠中药及天然药物资豫学术研讨会溺酾嘲黪 清除率／％=丝竺二丝二塑×loo 彳o 3 结果与分析 3．1灰毡毛忍冬中五环三萜类化合物对DPPH自由基的清除作用 通过对23个五环三萜皂苷单体进行DPPH自由基清除活性检测，筛选到了LM—l，LM一1-b， 对DPPH自由基表现出较强的清除作用，且清除能力具有明显的剂量依赖关系。在2．5州～80州 浓度范围内，随着受试化合物浓度的增加，对DPPH自由基的清除能力显著增强。IC50计算结果表 于绿原酸。 表l灰毡毛忍冬五环三萜皂苷LM．1