家蚕对桑叶中1-脱氧野尻霉素的富集规律研究.pdfVIP

蔼怎 聊!篙篙裟燃嚣篓罴蒹湍篓篙讨厶黧黼2012海峡两岸叠csNR全国笼10居中药及天然药物赛器学术研讨会黑黑黑曛 千百年来家蚕一生取食桑叶，本课题组前期研究及相关文献报道均发现，家蚕的任一生长发 育阶段(蚁蚕和熟蚕不吃桑叶除外)，其蚕体DNJ含量均大大高于桑叶中DNJ含量。家蚕从桑叶 中吸收富集的DNJ是全蚕粉中主要的降血糖活性成分。 DNJ为一种哌啶类多羟基生物碱，化学名称为3，4，5．三羟基一2羟甲基四氢吡啶，分子式为 c6H13N04，相对分子质量为163【11。由于具有Ⅱ一1，4一葡萄糖类似结构，能竞争性抑制0【．糖苷酶的活 性。DNJ及其衍生物具有降血糖、降血脂、降血压、护肝抗癌、抗病毒、抗氧化等作用【3。j，可用 于治疗糖尿病、肥胖病、病毒感染等。目前已发现多种植物和微生物具有合成和积累DNJ的特性， 其中自然界中以桑叶中DNJ含量最高[21。但是目前的相关研究还停留在通过动物试验比较分析品 种差异的阶段，对于蚕体内DNJ的富集规律研究较少‘8。111，从而限制了快速筛选药用、食用价值 高的新品种。 本实验研究了不同家蚕品种及蚕体不同组织器官中DNJ含量，并比较了各龄家蚕及其副产品 中的DNJ含量与所食桑叶中的DNJ含量，进一步探索DNJ的富集规律，从而找到一条更加有效 地获得DNJ活性物质的新途径，为开发新的降血糖和抗病毒等药物奠定基础。 1试剂及仪器 1．1试剂(略) 1．2仪器(略) 2．试验方法 2．1试验材料的制备(略1 2．2 DNJ的测定方法 2．2．1色谱条件f略) 2．2．2样品中DNJ的提取 mL0．05 mL的离心管中，加入10 mol·L。1的盐酸溶液，涡 准确称取0．19干燥的样品粉末于10 旋混合30 000 mL0．05mol·L。的盐酸溶液同 s，离心15min(12r·min。)，取上清液，残渣再加入10 前重复提取1次，合并2次提取液，置50111L容量瓶中加蒸馏水定容至50mL，备用。 2．2．3衍生化过程 min，之后加入0．1mol-L‘1的甘氨 mmol·L。1FMOC—Cl的乙腈溶液20血，混匀后于20℃水浴反应20 酸10此，让剩余的衍生化试剂反应，最后加入950肚0．1％的醋酸水溶液，混匀后用0．45肛m的一 次性针头过滤器过滤后，取10血进样分析。 3．结果与分析 3．1 不同品种家蚕幼虫体中DNJ含量的差异 利用相同的桑叶饲养不同家蚕品种，测定菁松等25个家蚕品种5龄第三天蚕体的中DNJ含量， 结果见表l。 由表1可以看出，不同家蚕品种的DNJ含量有显著差异，最高的为2042，含量为0．56％，最 低的是洞庭×碧波，含量为O．081％。含量最高的品种与最低的品种相差6．9l倍。从总体来看，原 种家蚕的DNJ含量多高于杂交种，杂交种中碧×波含量最高，洞庭×碧波最低。春种皓月×菁松、 菁松×皓月又高于夏种碧波×洞庭和洞庭×碧波。 一399— 笥墓“ “”湍黼裟裟篇慧黼鑫恭。黼 表l不同8种家蚕蚕体DNJ台■ 32家蚕蚕体不同部位、不同器官、不同组织DNJ台量分布变化规律的研究 解剖7021家蚕五龄蚕体，分别取蚕血、消化管、脂肪体、表皮、丝腺、排泄管、呼吸管等组 织器官，采用芴甲氧酰氯(FM0c．cI)柱前荧光衍生．高效液相色谱法分别测定各个组织器官中 DNJ含量。结果见图l 结果显不不同组织器官巾DNJ含量存在显著性差异，以蚕血液干粉中DNJ含量最高，其次 依次为消化管、马氏管、脂肪体、呼吸管和表皮，丝腺中DNJ未能检测到。说明蚕体的DNJ主 要集中累积在蚕消化管和血液中。 33家蚕及其副产物中DNJ的含量变化与食桑量的相关性 通过测定2种家蚕品种秋丰x白禾和白玉x秋丰不同阶段蚕体、蚕沙、蚕蜕厦其所食桑叶中DNJ 的含量，研究了家蚕投其副产物中DNJ的含量变化与食桑量的相关性。表2为家蚕不同发育阶段 所用桑叶的DNJ含量，龄职