鸡马立克氏病病毒814株细菌人工染色体的构建.pdfVIP

参考文献 a1．Relativecontrilmfiomofcodo[1 andleader tothe [1]Shixia J，Farfan—Atrilm，et efficiency Wang，Diego usagepromoter flet：luenc,e and ofHIV一1EnvDNAvaccine．Vaccine2006，24(21)：4531—4540． antigenexpressionimmunogenicity Smahel a1．ModifiedHPVl6E7Genes鹪DNAVaccine [2] Michal，懿豫Pavel，Ludvikov(1Viera，et againstE7一Containing OncogenicCells[J]．Virology，2001，281(2)：231—238． [3]Zhen andits toProtein Bin，Zhan】(i—mei．SignalPeptideSequenceApplicationExpression．Letters 296—298． [4] 鸡马立克氏病病毒814株细菌人工染色体的构建 崔红玉1“ 王云峰1“ 石星明1 童光志h 兰德松1 何 来1 仇华吉1 刘长军1 王 玫1 (1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001； 2．河北北方学院动物科技学院动物医学系 张家口075131) 摘要：拳研究通过构建表达Eco—gpt(Xanthine—gBaninephil Artificial 传选择标记(1．3kb)和带有细茵人工染色体(Bact耐al0l肼r啪咖fle，队c)基本功能基因序列的鸡马立克氏病病毒重组病 基中经过加压筛选，获得并纯化重组病毒；将重组病毒细胞总DNA电转化大肠杆茵，筛选共获得38个BAC分子克隆化病毒， 提取BAC—DNA转染鸡胚成纤维细胞以拯救重组病毒。结果，再次启动病毒感染．拯救了重组鸡马立克氏病病毒．本研究成 功构建了鸡马立克氏病病毒814株基因组全长感染性细茵人工染色体，为病毒的反向遗传操作提供技术平台。 关键词：鸡马立克氏病病毒；细茵人工染色体；分子克隆化病毒；感染性分子克隆 鸡马立克氏病(盹啦k’Sdisease，MD)是危害养鸡业的主要传染病之一，该病以T淋巴细胞增生、高度接触 disease 性传染以及造成鸡的严重免疫抑制为特征；其病原为鸡马立克氏病病毒(MaIek’svims，MDV)，属于疱 疹病毒科a一疱疹病毒亚科双链DNA病毒，基因组大小约为180kb…。MD作为研究病毒性肿瘤的理想模型 一直得到了病毒学界、医学界和兽医界的广泛重视14jJ，但由于MDV是典型的细胞结合病毒，基因组庞大难 以提取，使得在哺乳动物细胞中对MDV基因组进行基因操作和研究十分困难。细菌人工染色体技术的出现 解决了这一难题，通过构建MDV细菌人工染色体，可以在大肠杆菌中方便地对MDV基因组进行操作和研 究[2’3】。本研究的目的是构建鸡马立克氏病病毒814株全长基因组感染性细菌人工染色体。 1材料与方法 1．1细胞、病毒和试剂 原代和次代鸡胚成纤维细胞，由10日龄SPF鸡胚制备，SPF鸡胚由哈尔滨兽医研究所实验动物中心 ·★通信作者：电话：0451E—maihgztong@hvri．∞．册，y嘶@hvri．∞．crla 获￡论女0 19 提供；MDV Invitrog邸公司；pEco一耐由本室构建限制性内切酶、霉酚酸(myeophe肿licac试，MPA)、黄嘌岭(脚thine)91 Mdl