葡萄籽原花青素二聚体的提取分离和结构鉴定.pdfVIP

维普资讯 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 ·180 · 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs 第 36卷第 2期2005年 2月 葡萄籽原花青素二聚体的提取分离与结构鉴定 徐德平，孙 芸，谷文英 ，丁霄霖 (江南大学食品学院，江苏 无锡 214036) 20世纪 80年代以来，人们对原花青素的单聚 温 30℃，进样量 20 L。检测分流比5：1，280nm 体、二聚体、三聚体、四聚体和高聚体进行生化、药理 检测。质谱条件：负离子扫描 (ESI一， ／2260～ 活性的研究，发现其具有抗氧化、抗致突变、抗心血 1500)，毛细管电压 4．2kV，锥孔电压50V，光电倍 管疾病等活性，其中二聚体和三聚体活性最强[1]。葡 增器电压 650V，离子源温度 120℃，脱溶剂气温度 萄籽原花青素单体主要由(+)一儿茶素 (catechin)、 300℃，结果用MassLynx软件分析[5]。 (一)一表儿茶素(epicatechin)、(一)一表儿茶素没食子 1．3．2 葡萄籽提取物：葡萄籽 5kg粉碎后室温用 酸酯组成，各单体通过 4—6或4—8键相连，形成二 甲醇(料液比 1：7)提取 3次，提取液滤过，除去溶 聚、三聚、四聚等多聚体。葡萄籽中的原花青素由于 剂，石油醚脱脂，将脱脂后的物质用3倍体积的醋酸 聚合度、单体及连接键的不同，各聚合度可能的异构 乙酯萃取，反复多次，直到醋酸乙酯相无色为止，合 体数 目为 2一 ×3(一聚合度)，单二聚体就有 18 并醋酸乙酯相，蒸干，蒸发温度≤4O℃，得醋酸乙酯 种可能的异构体，结构非常复杂，各低聚体及各同聚 提取物 (用于分离单聚体化合物)。将醋酸乙酯提取 异构体之问极性相近，由于原花青素异构体数 目繁 后的剩余物蒸干，取少量固体物溶于甲醇，过 0．45 多，一般液相色谱仪也很难分开，能得到的异构体也 m膜后用HPLC—MS分析，余下用于二聚体化合 仅仅有有限的几种，使葡萄籽中原花青素的分析、分 物的分离。 离十分困难 [2叫]。目前国外对葡萄籽原花青素的研 1．3．3 二聚体化合物的分离：将醋酸乙酯提取后的 究非常多，国内的研究报道也有很多，但主要集中在 剩余物蒸干用适量水溶解，上聚酰胺柱 (600mm× 生理活性研究和生产开发方面，对低聚体的化学组 60mm)，先用去离子水洗脱，再用 甲醇梯度洗脱 成和结构研究很少。本研究利用RP—HPLC分析了 (20 、40 、60 )，分步收集。40 甲醇溶液洗脱得 葡萄籽粗提物中的二聚体原花青素的构成，并采用 流份A，60 甲醇溶液洗脱得流份B，将流份A部分 反相色谱柱分离得到2个二聚体化合物，并对其结 浓缩至一定体积后上 SephedexLH一20柱 (500 构进行了鉴定。 mm×35mm)，先用去离子水洗脱，再用甲醇梯度洗 1 材料与方法 脱，15mL收集一管，可得到C、D、E、F4个组分，每 1．1 材料：葡萄籽由中国长城葡萄酒公司提供； 组分主要含 1个化合物 ，将 C、D每个组分反复上 HPLC用甲醇为色谱纯，甲醇、石油醚 (30～60℃)、 HW-40柱 (500mm×35mm)，并用甲醇梯度洗脱， 醋酸乙酯等皆为AR级 (上海化学试剂采购供应 可得 2个纯化合物，分别为 I、Ⅱ。 站)；GF2．硅胶板 (山东烟台芝罘化工厂)；色谱柱： 1．3．4 二聚体化合物的结构鉴定：将所得 I、Ⅱ两 聚酰胺 (60目，浙江台州化工厂)，SephadexLH一20、 个 化合物用 DM