人工分子伴侣-离子交换色谱法对还原变性溶菌酶的复性.pdfVIP

样，用60％B平衡色谱饼后，用A泵进50％B液，用B泵连续进rhG-CSF的8．0tool·L．‘脲提取液， 峰高基本一致，但前者的峰形更好，更为对称，后者存在一定程度的拖尾。在前后两种情况下，rhG．CSF 的质量回收率分别为42．4％和40，5％。但与前者相比。后者简单，省时，容易操作和放大。 在优化后的条件下，即流速为10 泵进50％B液．用B泵连续进rhG．CSF的8．0 t001．L-1脲提取液。A、B泵的流速比为9：1。共进样 200mL，总蛋白含量约为1．6 g。收集不同时间段的色谱馏分，做电泳，结果表明进样和冲洗过程中 的色谱流出液中基本不含rhG℃sF，这表明10x200him I．D．HPHIC色谱饼基本上可以负载体积为 200mL，总蛋白含量约为1．6 可以看出，经10x200mm I，D．HPHIC色谱饼复性和纯化后的rhG-CSF中不存在二聚体或多聚体。 参考文献： 1．Xindu Wang，Journal B，2007，849：69-80 Geng,ChaozhanofChromatography 2．ChaozIlan 3．M Li，ZG CJanson，Proteinand Su，J ExpressionPurification,2004，33：l一10 4．XDGeng，QBal，YJZhang，etal，JBiotechnol，2004，113：137—149 P16-239 人工分子伴侣．离子交换色谱法对还原变性溶菌酶的复性 张秦铭王超展唪王骊丽耿信笃 西北大学化学系，西北大学现代分离科学研究所， 现代分离科学陕西省重点实验室， 西安710069 在众多的蛋白质复性方法中，蛋白折叠液相色谱法(proteinfoldingliquid 是发展较快的复性方法之一11捌。它的优点在于能够使蛋白质吸附于固定相之上．相应的减d,T蛋白 分子问的疏水相互作用，从而达到了抑制聚集，提高活性回收率的目的。同时在复性过程中，目标 蛋白还可以与杂质进行分离，实现了蛋白复性与纯化同时进行的目的。人工分子伴侣(artificial 体的形成，提高复性效率”j．此系统通常由去污剂和环糊精形成。 本研究将人工分子伴侣和离子交换色谱(IEC)模式的PFLC相结合，用于还原变性溶菌酶 剥离试剂。以本实验室合成的端基为邻苯二甲酸酐的弱阳离子交换填料为固定相，在流动相中含有 还原变性Lys在人工分子伴侣一离子交换色谱法(AMC．IEC)中复性的色谱圈。 通讯联系^：王超展一男·博士，Tel：029Email，璺圣要璺翌g壁盟!丛：星鱼坚：￡凸 基金项目；国家自然科学基金(No ，陕西省重点实验室重点科研计划项目(No．05JS61) 图1还原变性溶菌酶在AMC．IEC中复性的色谱图 0 +8mm01．L’‘B．CD+3t001．L-1脲+3ret001．LIGSH]0．6mmol·L”GSSG，pH-8 +ImmolL．1EDTA+8mmo]．L．I 的20mg·mL1还原变性Lys． ， 本实验研究了当流动相中含有不同脲浓度时，AMC．IEC对还原变性Lys的复性情况。结果表明， mol·L．1时达到最高， 随着流动相中脲浓度的增大，Lys的活性回收率先是逐渐增加，在脲浓度为3．0 之后随着脲浓度的进一步增大，活性回收率反而迅速降低。这是因为脲浓度小于3．0tool·L．1时，不能 有效抑制复性中间体之间的相互聚集，使得只有小部分蛋白质能够正确折叠为活性状态．而当脲浓 度大于3．0tool·L．1时，变性蛋白不能进行有效的卷曲和折叠．导致活性