蛋白激酶拮抗剂对大鼠气道纤毛运动频率的影响.pdfVIP

48 2000年中国博士后学术大会论文集 蛋白激酶拮抗剂对大鼠气道纤毛运动频率的影响 展新华姚尚龙 曾邦雄 (同济医科大学附属协和医院麻醉科，武汉430022) 摘要 为深入了解cAMP及cGMP对纤毛运动的作用机制，用选择性 cAMP依赖的蛋白激酶(PKA)拮抗剂Rp一8．Br-cAMPS、选择性 cGMP依赖的蛋白激酶(PKG)拮抗剂Rp-8一Br-cAMPS及竞争性蛋 白激酶拮抗剂H-9作用于培养大鼠纤毛上皮，以相差显微镜及成像 分析技术测定纤毛运动频率(CBF)。结果显示：(1)Rp-8一Br—cAMPS 慢。提示：只有在PKA和PKG同时被抑制时，纤毛运动才会减慢。 关键词 c伽cG脚蛋白激酶A蛋白激酶G纤毛运动 呼吸道上皮是保护肺组织免于病源体侵入的门户，纤毛运动是排出气道异物，防止 气道阻塞、感染的关键。临床常见麻醉手术后气道分泌物增多、痰淤滞、气道梗阻及呼吸 系统感染等。目前这砦并发症的发生机理并不十分清楚，因而也无十分有效的防治措 施。但术后刺激纤毛运动，增强粘膜清除力将有助于气道功能的改善。研究表明cAMP 及cGMP都能加快CBF，但目前尚无有关PKA、PKG阻断后CBF变化的报道。因而本 争性蛋白激酶拮抗剂I-I-9作用于纤毛，以了解PKA、PKG被单独或同时阻断后CBF的变 化。 1材料及方法 1 1组织培养 BRL，美国)，在 培养。培养液为含有10％胎牛血清及抗菌素的DMEM复合液(Gibco 3TC，5％CO：条件下孵育，隔天更换一次培养渡(15m1)。实验所用组织皆为第5天培养 组织。 1．2实验分组 实验共分4组，每组进行5次实验(n=5)，每次用一块组织。实验液为lm[新鲜 DMEM复合液。溶剂为0．01mmol／LPBS，每次移取5m试剂添加于实验液中。所以设 PBS作对照，其它三组试剂终浓度皆为0．1mmol／L。即PBS组、Rp一8一Br— O．01mmol／L 医药学与生物学分册 cAMPS组、Rp-8+Br-cGMPS组和H一9组。试剂皆由美国Alexis公司生产。 1．3纤毛运动测定 每次移取一块组织，加至实验液中。以IMT-2相差显微镜(Olympus，rI本)将实物放 记录；以Adobe 5分钟 Premiere软件(Apple，美国)处理图像，记数CBF。记录基础CBF 后加入各种试剂，继续观察25分钟，总记录时间为30分钟。每块组织只用一次。计数 (T2，)时CBF，每次实验随机计数3个细胞CBF，然后对5次实验所计数的CBF结果进行 统计处理。 1．4统计分析 数据以X±s表示，差异用方差分析处理，P0．05为差异显著，P0．05为差异不显 著。 ， 2结果 (1)PBS对CBF影响不显著(P0．05，表1)。 衰1各实验组CBF的变化(№．组织块敛=5。x±s) 05。 注：与基础值相比，*P0 变化不显著(P0．05，表1)。 变化不显著(PO．05，表1)。 (4)H一9对CBF的影响：给H-9后，CBF减慢(P0．05，表1)。 3讨论 本研究证明了只有同时阻断PKA和PKG后，大鼠气管粘膜纤毛运动才会减慢。证 据如下： 减慢，但变化都不显著。 (2)给予H-9以同时阻断PKA和PKG后，大鼠气管粘膜纤毛运动显著减慢。 纤毛的运动有赖于微管肌动蛋白ATP酶活性，该酶水解ATP，提供微管滑动的能 50 2000年中国博士后学术大会论文集 量”1。在纤毛上皮，cAMP或cGMP都可以增加肌动蛋白ATP酶活性。进一步的研究表 明，cAMP信息传递系统激动剂异丙肾上腺素”J、cGMP信息传递系统激动剂GSNO【4