Caveolin-1反义寡核苷酸对SMMC7721细胞增殖和VEGF表达的影响.pdfVIP

ChineseJoumalofPathophysiology 201o，26()； Z二 · 1637 · [文章编号】 1000-4718(2OlOJO8—1637—03 Caveolin一1反义寡核苷酸对 SMMC7721细胞增殖 和 VEGF表达的影响 李石旺 ， 陈 芬， 欧阳驰， 陈晓岚， 莫艳秀， 汤银娟， 刘科峰 (湘南学院基础医学课部，湖南 郴州423000) [摘 要] 目的：研究 caveolin一1反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖和血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。 方法：脂质体介导caveolin一1反义寡核苷酸瞬时转染 SMMC7721细胞，Westernblotting检测转染效果；MTY法和 ELISA法分别检测转染前后SMMC7721细胞增殖和分泌VEGF的变化。结果：转染48h后 ，反义寡核苷酸组caveo。 lin一1蛋白表达水平明显低于对照组；MTY检测结果显示 ，转染后的SMMC7721细胞显著增殖 ，增殖率为90．9％； ELISA检测结果显示，转染后的SMMC7721细胞分泌的VEGF显著升高(P0．O1)。结论：Caveolin一1反义寡核苷 酸抑制caveolin一1的表达，而caveolin一1具有抑制SMMC7721细胞的增殖和其分泌 VEGF的作用，有望成为肿瘤 治疗的新靶点。 [关键词] Caveolin一1；寡核苷酸类，反义；细胞增殖 ；血管内皮生长因子 [KEYWORDS] Caveolin一1；Oligonucleotides，antisense；Cellproliferation；Vascularendothelialgrowthfactors [中图分类号】 R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．037 小窝(caveolae)是一个富含胆固醇、直径为50—100nm SMMC7721细胞系购 自武汉大学典型培养物保藏中心。 的细胞膜表面的内陷结构，广泛存在于各种类型的细胞中， 2 细胞培养 其标志性蛋 白为小窝蛋 白(caveolin) 。Caveolin包括 caveo— SMMC7721细胞用 DMEM培养基培养至对数生长期，用 lin一1、caveolin一2和caveolin一3等3种 。其中，caveolin一 含 0．25％胰酶消化，离心 (125r／min，5min，20℃)收集细 1因与肿瘤的恶性增殖、侵袭、转移、血管生成以及信号转导 胞 ，调整细胞密度为 1X10。cells／L，并接种于6孔细胞培养 有关而逐渐受到人们关注 l4J。但 目前关于caveolin一1与肝 板 ，每孔定容2mL，于37℃、5％CO 培养箱培养。 癌的关系以及 caveolin一1对肝癌细胞分泌的血管内皮生长 3 寡核苷酸转染方法 因子(vasculraendothelialgrowthfactor，VEGF)影响的研究还 实验分为对照组、Lipofectamine2000组和寡核苷酸复合 不多。本文通过用caveolin一1的反义寡核苷酸沉默caveolin 物组。转染前准备寡核苷酸复合物，即Lipofectamine2000用 一 1。研究caveolin一1对肝癌细胞的增殖及其分泌的血管内 opti—MEM1稀释，室温下孵化 5min，以 Lipofectamine2000 皮生长因子 (vasculraendothelialgrowthfactor，VEGF)的影响， ：RNA=1 L：1 的比例加入相应量的寡核苷酸，混合物室 可为今后肝癌的基因治疗提供理论基础。 温下孵化20min。待细胞达到80％一90％汇合后进行转染， 用无血清DMEM洗涤细胞，每孔加入0．5mL无血清DMEM， 材 料 和 方 法 寡核苷酸复合物组逐滴加入0．5mL寡核苷酸复合物 (对照 1 材料