前列腺特异的转录因子NKX3.1上调Dicer1基因的表达.pdfVIP

· 1764· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2010，26(9)：1764—1768 [文章编号] 1000—4718(2010)09—1746—05 前列腺特异的转录因子 NKX3．1上调 Dicerl基因的表达 张 菊 ， 关恒云 ，张鹏举 ， 陈蔚文 ， 陈兆波 ，倪娜娜 ，朱闻捷 ， 王 坤 ， 胡小燕 ， 姜安丽 (山东大学 医学院生物化学与分子生物学研究所，医学院，山东 济南 250012) [摘 要] 目的：研究前列腺特异转录因子 NKX3．1对Dicer1基因表达的影响。方法：转染 peDNA3．1一 NKX3．1至前列腺癌PC3细胞，通过 G418筛选，有限稀释法克隆培养获得 NKX3．1稳定转染的PC3细胞 一PC3 (+)；采用基因芯片检测NKX3．1对前列腺癌PC3细胞基因组表达谱的影响。进一步应用RT—PCR、Westernblot- ting进行验证。为进一步检测Dicer1表达增高 、促进microRNA的成熟作用，构建了microRNAlet一7a一1靶序列一 报道基因融合质粒，转染PC3细胞和PC3(+)细胞，通过报道基因检测成熟microRNAlet一7a一1对其靶序列的作 用。结果：基因组芯片显示，NKX3．1稳定表达的PC3(+)细胞中，Dicerl表达明显高于 PC3细胞。RT—PCR、 Westernblotting结果验证 PC3(+)细胞中DicerlmRNA和蛋白质的表达水平均高于PC3细胞。microRNAlet一7a 一 1靶序列一报道基因融合质粒 ，转染PC3细胞和PC3(+)细胞后，报告基因检测 ，PC3(+)细胞中荧光素酶活性 明显低于PC3细胞。结论：NKX3．1可上调前列腺癌PC3细胞中Dicerl的表达，促进microRNA的成熟及作用。 [关键词] 同源盒基因NKX3．J；PC3细胞；基因，Dicerl [中图分类号] Q7 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．09．021 Up--regulationofDicerlgeneexpressionbyprostate-·specifictranscrip-- tionalfactorNK ． ZHANGJu，GUANHeng—yun，ZHANGPeng—ju，CHENWei—wen，CHENZhao— bo，NINa—na，ZHUWen—iie，WANGKun ，HUXiao—yan，JIANGAn—li (InstituteofBiochemistryandMolecularBiology，ShandongUniversitySchoolofMedicine，ShandongUniversitySchoolof Medciine， ，l0n250012，China．E—mail：fianganli@sdu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheeffectofNKX3．1ontheDicerlgeneexpression．METHODS：The NKX3．1eukaryoticexpressionplasmid[pcDNA3．1一NKX3．1]wastransfectedintoPC3cells．Thestableclones[PC3 (+)cells]wereisolatedusingcloningcylindersandgrewcontinuouslyunderG418selection．Thegeneexpressionprofile inPC3(+)cellsinducedbyNKX3．1wasanalyzedbycDNAmieroarray．TheeffectofNKX3．1ontheDicer1expression wasfurtherinvestigatedbyRT—PCRandWestern blotti