胰岛素通过活性氧的产生促进VEGF表达及血管平滑肌细胞迁移和增殖.pdfVIP

· 272 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(2)：272-277 [文章编号] 1000—4718(2013)02—0272—06 胰岛素通过活性氧的产生促进 VEGF 表达及血管平滑肌细胞迁移和增殖 梅爱红 ， 刘俊许 ， 陈思锋 ， 孟 丹 (同济大学附属第十人民医院诊断学教研室，上海200072；。复旦大学上海医学院生理与病理生理学系，上海200032) [摘 要] 目的：探讨活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)在胰岛素促进的血管平滑肌细胞迁移和增殖中 的作用及分子机制。方法：采用原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞，应用 DCF—DA荧光探针检测细胞内ROS 的生成；应用实时定量PCR、Westernblotting和ELISA法检测mRNA和蛋白的表达；应用转染报告基因的方法检测 基因的转录活性；划痕法测定细胞迁移；CCK一8法测定细胞增殖。结果：胰岛素处理后血管平滑肌细胞内ROS产 生明显增加。过氧化氢酶和NADPH氧化酶抑制剂二亚苯基碘翰 (DPI)明显抑制胰岛素促进的ROS生成及p-Akt、 p-p70S6K1和p-ERK1／2蛋白的表达。过氧化氢酶和DPI明显降低胰岛素促进的血管内皮生长因子 (vascularendo· thelialgrowthfactor，VEGF)的mRNA和蛋白表达及转录激活。抑制 ROS产生明显抑制胰岛素刺激的血管平滑肌 细胞迁移和增殖。结论 ：胰岛素通过 NADPH氧化酶途径促进血管平滑肌细胞ROS产生。ROS介导了胰岛素促进 的Akt／p70S6K1和ERK信号通路的激活、VEGF表达及血管平滑肌细胞的迁移和增殖。 [关键词] 胰岛素；活性氧；血管平滑肌细胞；血管内皮生长因子；细胞增殖；细胞迁移 [中图分类号] R363．2 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2013．02．015 Insulin stimulatesROS production to promote VEGF expression，cells migrationandproliferationofvascularsmooth musclecells MEIAi—hong ，LIUJun—xu ，CHENSi—feng，MENGDan (DepartmentofDiagnosis，theTenthPeoplesHospitalofTongfiUniversity，Shanghai200072，China；Departmentof PhysiologyandPathophysiology，FndanUniversityShanghaiMedicalCollege，Shanghai200032，China．E—mail：dmeng @ fndan．edu．cn) [ABSTRACT]AIM：Todeterminetheroleandmechanismofreactiveoxygenspecies(ROS)inthemirgationand proliferationofinsulin—stimulatedvascularsmoothmusclecells(VSMCs)．METHODS：PrimaryVSMCswereisolated from theratthoracicaortasandculturedinvitro．ROSproductionwasmeasured byDCF—DA staining．Real—timePCR， Western blotting，andELISAwereemployedtodetectthemRNA expressionandproteinlevelofvascularendothelialrgowth factor(VEGF)．Thegenetrnascriptionalactivitywasdetemrinedbyreporterassay．Cellmirgationandproliferationwere measuredb