异丙酚对大鼠脑缺血再灌注海马细胞周期因子变化及神经元凋亡的影响.pdfVIP

· 810 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(4)：810—812 [文章编号] 1000—4718(2009)04—0810-03 异丙酚对大鼠脑缺血再灌注海马细胞周期 因子变化及神经元凋亡的影响 宋铁山， 王 欣， 李旭光 (温州医学院基础医学院解剖教研室，浙江 温州325035) [摘 要] 目的：探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马神经元细胞周期蛋白1(cyelinD1)和细胞周期蛋白依 赖性蛋白激酶4(cyclin—dependentkinase4，CDK4)的表达与神经元凋亡的关系及异丙酚的脑保护作用。方法：采 用大脑中动脉内栓线阻断法 (middlecerebralarteryobstruction，MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型。用免疫印迹 法(Westemblotting)观察cyclinD1和CDK4蛋白的表达；采用流式细胞仪检测海马神经元凋亡。再灌注48h时进 行大鼠神经功能缺陷比较。结果：(1)异丙酚可以改善大鼠脑缺血再灌注后的神经功能缺陷(P0．01)；(2)与假 手术组比较，脑缺血再灌注48h后缺血侧海马神经元 cyclinD1、CDK4表达明显升高、凋亡细胞数明显增多(P 0．01)。与缺血再灌注组比较，异丙酚组海马神经元cyclinD1、CDK4的表达和凋亡率明显降低 (P0．05)。结论： 脑缺血再灌注后缺血侧海马cyclinD1、CDK4表达增强，这可能是介导脑缺血再灌注后神经元凋亡的机制之一；异 丙酚可下调神经元cyclinD1、CDK4的表达 ，抑制神经元凋亡，减轻缺血再灌注对大鼠海马神经元的损伤。 [关键词】 脑缺血；再灌注；细胞周期蛋白D1；细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4；细胞凋亡；异丙酚 [KEYWORDS] Brainischemia；Repeffusion；CyclinD1；Cyclin—dependentkinase4；Apoptosis；Propofol [中图分类号】 R338．2 [文献标识码] A 异丙酚是临床上脑损伤外科手术麻醉的常用药物。研 100ms／kg(购于英国阿斯利康公司)。缺血再灌注组于缺血 究证实，麻醉剂量异丙酚对实验性大鼠脑缺血再灌注损伤有 前腹腔注射等量生理盐水。假手术组除不插线外，其余步骤 保护作用…，还有实验发现，异丙酚具有抑制神经细胞凋亡 同缺血再灌注组。 的作用 。但其细胞凋亡发生的机制还不清楚。细胞周期 3 神经功能缺陷评分 素 (eyclins)和细胞周期素依赖激酶 (CDKs)是细胞周期调控 参照Longa等 的评分方法进行行为学评分。标准为0 的关键成分。目前认为cyclins及CDKs的功能不仅限于细胞 分：无神经功能障碍；1分：不能完全伸展右前肢；2分：行走时 周期的调控，而且参与了细胞的凋亡过程。Cyclins及 CDKs 向右侧转圈；3分：行走向右侧跌倒；4分：完全不能行走。累 与神经元凋亡之间关系的研究已引起人们的关注。为此，本 计 1分以上即为模型成功。 研究旨在观察大 鼠脑缺血再灌注后海马区cyclinD1及 CDK4 4 Westernblotting检测 的表达及其对神经元凋亡的影响，探讨异丙酚的脑保护作用 各组大鼠于术后48h活体断头取脑，在冰面上快速分离 机制 出缺血侧海马(CA1区)，约30mg，然后进行蛋白提取和浓度 测定。其过程大致如下：0．2％TYBS洗 PVDF膜，5％脱脂奶 材 料 和 方 法 粉封闭1h；1：200兔多克隆cyclinD1、CDK4I抗4℃孵育过 1 动物与分组 夜；0．2％TYBS洗膜，DAB显色。应用凝胶成像系统 (美国， 健康成年雄性Wistar大鼠50只，体重250—300g(温州 UVPDigiDOC—It)成像并进行分析。设立阴性对照