丛枝菌根真菌与哈茨木霉菌合用对连作丹参生长及质量的影响.docVIP

丛枝菌根真菌与哈茨木霉菌合用对连作丹参生长及质量的影响 　　[摘要]该文探讨田间条件下丛枝菌根真菌（AMF）与哈茨木霉菌合用对丹参生长及质量的影响。采用田间小区试验来进行研究，使用HPLC测定丹参地上部分和地下部分有效成分含量，通过形态观察并计算根部发病率，并结合方差统计学方法对各指标的测定结果进行分析。结果显示，单独接种AMF以及AMF与哈茨木霉菌合用能够有效的降低连作丹参根部病害的发生率，其中AMF与哈茨木霉菌合用效果更佳，比CK组降低了61.50%。几种处理对丹参生物量影响没有显著差异，但都能提高丹参根部各种有效成分的含量。单独接种AMF以及AMF+哈茨木霉都能显著提高丹参根中丹酚酸B 的含量（P 0.05），其中AMF对丹酚酸B促进作用最明显，提高了27.97%；接种AMF能显著提高丹参根丹参酮I和丹参酮ⅡA的含量（P 0.05），其中丹参酮I约提高了70.14%；丹参酮ⅡA约提高了51.42%。另外，单独接种AMF以及AMF+哈茨木霉均能显著提高丹参根中隐丹参酮的含量，提高了约30.67%。从而得出单独接种AMF以及AMF+哈茨木霉能够有效减低连作丹参病害的发生率，同时提高连作丹参药材的质量。 　　[关键词]丹参；丛枝菌根真菌；哈茨木霉菌；HPLC；含量测定 　　丹参Salvia miltiorrhiza Bge.，俗称活血根，是世界公认的治疗心脑血管病的首选药物之一，年需求量15 000 t左右，是栽培面积较大的药材之一，其主要栽培地区为四川、陕西和山东。对四川、陕西地区调查结果表明连作加剧地下根部病害的发生，2～4年连作地块的发病率都高于61%[1]。本课题组对山东莱芜栽培丹参病害进行调查，也发现三年生或者重茬丹参根部病害的发生率达到了60%～70%。丹参根部病害传播蔓延较快，染病后的丹参植株长势衰弱，严重时地上部分枯死，根的木质部完全腐烂成黑褐色，产量显著降低，并且外观性状也不符合药用要求。 　　已有研究报道表明栽培丹参病害的发生与多种病原菌有关[2]，且属于土传病害，目前采用化学农药防效甚微。利用土壤有益微生物菌剂，快速恢复土壤微生态平衡是解决中药材土传病害的最佳选择[3]。目前的研究表明丛枝菌根真菌、木霉菌、枯草芽孢杆菌以及假单胞菌等对于土传病害都具有防治效果[4-8]。本课题组前期的研究表明丛枝菌根真菌能降低丹参根部病害的发生。但是，对于多种致病菌复合侵染的药用植物，采用单一生防菌菌株适应性差、环境依赖性强、需菌量大且防治效果偏低，有时效果并不明显[9]。基于此，本文在前期研究的基础上，研究AM菌+哈茨木霉菌对连作丹参发病率、生长及几种有效成分含量影响，为应用生防菌来防治连作丹参病害提高药材品质提供科学参考和依据。 　　1材料 　　供试AM菌Glomus versiforme （Karsten） Berch由三叶草Trifolium repens L.扩繁，用其根段、菌丝体、孢子及其混合物作为菌剂。哈茨木霉菌Trichodema harzianum购自美国拜沃公司。 　　Waters 2695 HPLC系统（自动进样器），Waters 2996 PDA检测器；数据处理机：Waters 色谱工作站。乙腈（色谱纯）、磷酸（分析纯），甲醇（色谱纯）。 　　对照品：丹参素（批号 1103-110101）、迷迭香酸（批号 M24-110421）、丹酚酸B（批号1022-101019）、二氢丹参酮（批号 E06-110116）、隐丹参酮（批号 Y53-110616）、丹参酮Ⅰ（批号 1428-070321）、丹参酮ⅡA（批号 1067-080314），由江西本草天工科技有限责任公司提供。 　　2方法 　　2.1田间试验处理 　　试验在山东莱芜白花丹参基地上进行。试验地为连作3年的丹参地块，为沙壤土。实验地设置4个处理：G. versiforme处理组（AMF组），哈茨木霉菌处理组，G. versiforme与哈茨木霉菌合用处理组，CK对照组。小区设置为随机区组排列，重复数为3次，共计12个小区，小区面积8 m2。 　　将G. versiforme菌剂以 100 g/钵分别放入营养钵内，对照则加入等量的灭菌接种物，并与钵中土壤混匀后播种。将该钵放入塑料大棚内，待丹参6个月大，幼苗长至 3～5片真叶期开始移栽并进行菌根侵染率的检测。哈茨木霉菌按照说明书在移栽时采用土壤穴施处理。以发病株数占总株数的百分率为发病率。 　　将采挖6个月的新鲜丹参去泥沙，在阴凉处阴干。采用天平分别称量地上部分和地下部分的干重，进行统计分析。 　　2.2有效成分含量测定方法 　　2.2.1 对照品制备 精密称取丹参素1.02 mg、迷迭香酸4.07 mg、丹酚酸B 6.16 mg、二氢丹参酮1.01 mg、隐丹参酮2