归肺理气方对痰热壅肺证慢性阻塞性肺疾病大鼠血清与肺组织MMP―9和TIMP―1的影响.docVIP

归肺理气方对痰热壅肺证慢性阻塞性肺疾病大鼠血清与肺组织MMP―9和TIMP―1的影响 　　[摘要] 目的 观察归肺理气方对痰热壅肺证慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠血清与肺组织基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的影响。 方法 将61只SD大鼠随机分为7组（正常组、正常+中药中剂量组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、泼尼松组），采用香烟熏吸加气管内注入脂多糖（LPS）法建立大鼠痰热壅肺证COPD模型。予归肺理气方高、中、低3个浓度及强的松灌胃干预28d，检测血清与肺组织MMP-9和TIMP-1含量。 结果 模型组大鼠血清与肺组织的MMP-9和TIMP-1含量以及MMP-9/TIMP-1值较正常组显著增加（P0.05），中药中、高剂量组与泼尼松组的MMP-9量以及MMP-9/TIMP-1值较模型组显著下降（P0.05）。 结论 归肺理气方可调节痰热壅肺证慢性阻塞性肺疾病大鼠的MMP-9/TIMP-1失衡，可能有一定的改善COPD气道重塑作用。 　　[关键词] 归肺理气；慢性阻塞性肺疾病；基质金属蛋白酶-9；基质金属蛋白酶组织抑制剂-1 　　[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）19-30-04 　　慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一种常见的慢性呼吸系统疾病，其特点是气流受限不完全可逆、呈进行性发展。确切的病因尚未完全阐明，但认为与肺部对香烟烟雾等有害气体或有害颗粒的异常炎症反应有关。COPD急性加重时患者出现呼吸困难、咳嗽、咳痰急性加重，病情变化大于每日自然病程变化程度，并且需要改变日常治疗方案[1]。研究证据表明，在西医常规治疗基础上应用中药治疗COPD急性加重期，可以显著提高疗效、明显缩短病程、减少并发症、改善肺通气功能、降低致残率等[2-3]。与西医的治疗手段相比，传统中药具有标本兼治、双向调节且毒副作用小的优势，为COPD急性加重期的治疗带来了新的思路与方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 动物与分组 SD大鼠61只，雄性，体重（240±20）g，购于中科院上海实验动物中心，合格证号SCXK（沪）2002-0010，饲养于上海中医药大学实验动物中心清洁级动物实验室。将大鼠随机分为7组（正常组、正常+中药中剂量组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、泼尼松组）。 　　1.1.2 受试药物 归肺理气方组成：鱼腥草9g、黄芩9g、炙麻黄9g、杏仁6g、葶苈子6g、前胡6g、紫苏6g、甘草6g。根据《中药药理研究方法学》[4]计算出中药低、中、高剂量组的人鼠等效剂量分别为2.12、4.25、8.50g/kg，即分别为人体 　　临床给药剂量的0.5、1.0、2.0倍。按传统工艺制备成水煎剂，减压浓缩至0.212、0.425及0.850g/mL备用。泼尼松片（上海信谊药业有限公司，批号：121106），研成粉末，加蒸馏水溶解，按6mg/kg灌胃。 　　1.1.3 仪器与试剂 动物熏吸箱（60cm×50cm×40cm），自制；18号静脉套管针（马来西亚制造）；脂多糖（LPS，Sigma公司）；大前门牌香烟（上海烟草公司，烤烟型，焦油量12mg，烟气烟碱量0.9mg，烟气一氧化碳量14mg）。MMP-9试剂盒（南京建成生物工程研究所，批，TIMP-1试剂盒（南京建成生物工程研究所，批。DK-S22电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；P20、P200、P1000吉尔森移液器，法国Gilson公司；Centrifuge 5417R型低温高速离心机，德国Eppendorf公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 痰热壅肺证COPD大鼠模型的制作 根据相关文献[5]，采用气管注脂多糖加熏香烟方法：在第1天和第14天，予1%的戊巴比妥钠（40mg/kg）腹腔注射麻醉，仰卧位固定于大鼠固定板，暴露声门，将18号静脉套管针快速插入气管，拔出针芯，用1mL注射器注入溶于生理盐水的LPS 200μL（1g/L），然后将大鼠固定板直立旋转，使LPS能够均匀分布于两肺。正常组注入生理盐水。第2～28天（第14天除外）将大鼠置入60cm×50cm×40cm熏吸箱内，注入大前门牌过滤嘴香烟烟雾，浓度约5%，每天上午、下午各1h。制作28d即为痰热壅肺证COPD大鼠模型。正常组注入生理盐水，不予熏烟。 　　1.2.2 给药干预与取材 造模完成后第2天开始，正常组与模型组给予饮用水，中药给药组给予不同浓度的归肺理气方，泼尼松组予泼尼松片粉末溶液，连续给药28d，在末次给药