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注射雪胆乙素在大鼠体内药动学研究 　　[摘要] 建立血浆样品中雪胆乙素的测定方法，研究雪胆乙素在大鼠体内的药动学特征。大鼠经尾静脉注射给药，以苯海拉明为内标（internal standard，IS），采用液相色谱-串联四级杆质谱（liquid chromatography tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）法测定不同时间点大鼠血浆中雪胆乙素浓度。质谱采用电喷雾（ESI） 离子源，多反应监测模式正离子检测，确定目标化合物及内标的离子对分别为m/z 503.2/113.1和m/z 256.0/167.2。色谱柱为Agilent ZOBAX SB-C18（2.1 mm×50 mm，1.8 μm），甲醇-0.1%甲酸55∶45等度洗脱，流速为0.2 mL?min-1。采用DAS 2.0软件对所得的血药浓度进行拟合，求算相应的药动学参数。大鼠经尾静脉注射雪胆乙素3.0 mg?kg-1，目标物血浆质量浓度在10.5～3 150 μg?L-1内线性关系良好（R2=0.996），标准曲线定量下限为10.5 μg?L-1，信噪比S/N=12；日内精密度RSD6.9%，日间精密度RSD14%；准确度RE在0.20%～3.7%；提取回收率在92.7%～97.1%。尾静脉注射雪胆乙素的药动学参数AUC0-t为（811.615±111.578） μg?h?L-1，t1/2为（1.285±1.390） h，CL为（3.627±0.487） L?h?kg-1，Vd为（6.721±7.429） L?kg-1。该研究建立了一种简便准确、灵敏度高、特异性好的测定雪胆乙素血药浓度的方法，首次报道了雪胆乙素在大鼠体内的药物代谢动力学特征。 　　[关键词] 雪胆乙素；LC-MS/MS；药动学特征 　　[收稿日期] 2014-01-19 　　[通信作者] 姚庆强，博士，硕士生导师，Tel：（0531E-mail： yao_imm@163.com 　　[作者简介] 徐晓婷，硕士研究生，TelE-mail： xxtzxl@163.com 　　雪胆别名金龟莲、金盆、罗锅底等，为葫芦科植物雪胆Hemsleya amabilis Diels及其同属数种植物的干燥块根，性味苦，寒，具有清热解毒，利湿消肿，健胃止痛的功效[1]。雪胆属植物主要分布于我国西南地区，其中云南、四川、贵州拥有该属植物的92%[2-3]。雪胆为我国传统中药材，现收载于《中药成方制剂》（第19册），广泛用于治疗菌痢、肠炎、支气管炎、急性扁桃体炎等[4]。大量文献报道发现，雪胆属植物富含葫芦素类化合物，具有细胞毒、抗癌、抗菌抗炎、抗HIV等多种药理活性[5-8]。雪胆乙素（cucurbitacin Ⅱ） 是从雪胆药材中提取的一种四环三萜类成分，目前已有雪胆乙素抑制肿瘤细胞的相关报道[9-10]，但尚未发现雪胆乙素在大鼠体内药动学方面的研究。本研究采用液相色谱-串联四级杆质谱（LC-MS/MS） 法测定大鼠血浆中雪胆乙素的浓度，首次阐明了雪胆乙素经尾静脉注射给药后大鼠体内的药动学特征，为其在临床研究和新药设计提供理论依据。 　　1 材料 　　1.1 药品与试剂 雪胆乙素对照品，由本实验室从雪胆药材中分离制得，经HPLC分析纯度为98.6%；盐酸苯海拉明（内标物质），购于中国食品药品检定研究院，批号为100066-200807；氯化钠注射液，购于辰欣药业股份有限公司，批号为1206085121。甲醇、乙腈为色谱纯，购于美国TEDIA公司和Burdick Jackson公司；水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。 　　1.2 动物 健康雄性Wistar大鼠，体重（230±10） g，购于山东大学实验动物中心，动物合格证号SCXK（鲁） 2009-0001。实验前于本室动物房饲养7 d，饲养温度为20～25 ℃，饲养环境湿度为（45±10）%。 　　1.3 仪器 Agilent 6410三重四级杆质谱仪，配有电喷雾（ESI） 离子化源，购自美国Agilent公司；Agilent 1200高效液相色谱仪，包括二元泵、在线脱气机、柱温箱、自动进样器，购自美国Agilent公司；XS105电子天平，购自瑞士Mettler公司；TGL-16G高速台式离心机，购自常州澳华仪器有限公司；SK-1快速混匀器涡流混悬仪，购自常州澳华仪器有限公司；多功能样品浓缩仪，购自北京普立泰科仪器有限公司。 　　2 方法 　　2.1 质谱条件 采用电喷雾（ESI） 离子源，多反应监测模式（MRM），正离子方式检测，雪胆乙素和内标的碰撞诱导解离电压（CID） 分别为25，20 eV；碎裂电压分别为110，120 V；毛细管电压（±） 4.0 kV；