蛋白质与核酸和小分子的相互作用的共振瑞利散射光谱及其分析应用.pdf

蛋白质与核酸和小分子的相互作用的共振瑞 利散射光谱及其分析应用 分析化学专业硕士研究生：李珊 指导教师：刘绍璞教授 摘 要 近年来，蛋白质与核酸之间的反应由于其重要的生理学意义而受到广泛的关注，多种分析方 法都应用于这两种生物大分子之间的反应及其识别机理的研究。但分子光谱法在该领域中的应 用则较少。共振Rayleigh散射(ResonaⅡceRayleighscatcering，RRs)技术作为新兴的、简便的、 高灵敏的分析技术受到人们的广泛关注，周时由于其对大分子非键作用，如缔合、聚集、偶极 一偶极作闩=I等非常敏锐，这使其具有生物大分子的问的反应机理研究和测定、表征及反应历程 的研究极为有利。因此，我们以RRs法和吸收光谱法研究了蛋白质幂l核酸之间的相互作jH、光 谱特征、反应机理，本文还研究了用鞣酸测定蛋白质和某些金属蝥合物测定核酸的新RRs法。 1 蛋白质与DNA相互作用的吸收光谱研究 本文尝试川紫外吸收光谱法研究蛋白质与核酸的相互作刚，并将其应其用于反应机理的探 讨。结果表明，蛋向质．核酸间的反应可引起紫外吸收光谱的变化。通过对其变化的研究，可以 提供关于核酸．蛋白质相互作用的一些新的信息，基于此反应还可发展出紫外分光光度法测定核 ng之间，而对RNA灵敏度较低。当用hsDNA测定蛋白质时，对不同的蛋白质的摩尔吸光系数在 2．9x105—9．92×106 4．1，唱’mL．1(P印sin)，2．0一g。札_1(BSA)和28腭‘m∥fI对psin)。 2胰蛋白酶与DNA相互作用的吸收光谱研究 本文研究了胰蛋白酶_DNA体系。文中研究了反应体系的RRS光谱特征、适宜的反应条件、反 应的坌i!f合比，并推测了两者的结合方式。基于此反应还可将其J}j予核酸和蛋白质的相互测定。 1 当用hsDNA测定胰蛋白酶时，检出限为39．0 ng·mL1，而当用胰蛋白酶测定DNA时，方法 具有较高的灵敏度，对DNA的检出限达0．42～1．06 ng-mUl之间。 3 hsDNA与蛋白质相互作用的RRs研究 f1 我们研究了hsDNA与人血清白蛋白、牛血清白蛋白、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、血红蛋白和Y球 蛋白相互作．Ll』的RRS光谱特征，结果表明上述儿种蛋白质与hsDNA发生相互作用，且能够引起 RRS不同程度地增强。文中研究了反应体系的RRS光谱特征、适宜的反应条件，，r结合其他分子 光谱方法推测了两者的结合方式。此反应可以刚于蛋白质和核酸的相互反应。当J}JhsDNA测定 ’ L_1。而用各种蛋 “globin)、0．1～18flg·mUl(hemoglobin)．其检测限从12．6ng·mUl至1143．4ng·m 白质测定hsDNA时．分别在0．4x10‘’～1．5 O．1x10’3～2．7fig·mL1(Papain)、0．4x10一～2．5 ng·mLl(1ISA)、0．7ng·mL1(BSA)、0．3ng·mL_1(Papain)1．1 和0．4ng·mL-1(hemoglobin)。 4鞣酸RRS法测定蛋白质 本文研究了人血清白蛋白、牛血清白蛋白、胃蛋白酶、术瓜蛋白酶和胰蛋白酶与鞣酸(tannic acid，TC)相互作川的RRS光谱特征，结果表明人血清白蛋白与牛血清向蛋白和鞣酸的相互作 用能够引起RRS的更大增强。文中研究了反应体系的RRS光谱特征、适宜的反应条件、反应的 结合比，并推测了两者的结合方式。基丁此反应还可将其用于核酸和蛋白质的相互测定。当用 应不高，因此该方法可以用于在有其它蛋白共存的情况F测定自蛋白，应用该方法测定了血清 中的白蛋白含量，结果与考马斯亮蓝法结果相符合。 5 BDHA金属螯合物测定hsDNA hsDNA形成三元配合物之后，能引起RRS的增强。三种络台物具