腺病毒载体介导的siRNA对3T3-L1细胞脂联素表达的影响.pdfVIP

维普资讯 第 30卷第 14期 第 三 军 医 大 学 学 报 Vo1．30．No．14 1312 2008年 7月 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MIUTARIS TERTIAE Ju1．20o8 文章编号：1000-5404(2008)14．1312．40 腺病毒载体介导的siRNA对3T3一L1细胞脂联素表达的影响 孟凡萍 ，杨刚毅 ，李 钶 ，李 伶 ，齐晓亚 ，刘建雷 ，李 荣 (重庆医科大学：-医学检验系临床生物化学教研室， 临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室，重庆400016，附属第二医院内分泌科，重庆400010) 摘 要：目的 构建携带小鼠脂联素 (Acrp30)siRNA腺病毒载体，并检测其对小鼠脂肪细胞Acrp30表达的影响。 方法 首先用 nI+NotI双酶切本课题组前期构建的质粒 pSilencer1．0-U6．Acrp30．1和psilencer1．0-U6．Acrp30—3，得到 目的片段U6一Acrp30—1和U6一Acrp30—3，并将 目的片段亚克隆入穿梭质粒 pShuttle，用P I线性化穿梭质粒 pshutde．U6一 Acrp30-1和pShuttleU·6A·crp30—3，并与pAdeasy一1在 BJ5183内同源重组，筛选、鉴定、测序后，在XL10一Gold中扩增重组腺 病毒质粒，最后在293细胞 内包装扩增为重组腺病毒 Ad—Acrp30—1和Ad—Acrp30—3。用此重组腺病毒感染 3T3．L1脂肪细 胞，用 RT-PCR和ELISA检测其 Acrp30mRNA和蛋 白表达。结果 设计并构建了小鼠Acrp30基因特异性 siRNA腺病毒 载体，该载体感染脂肪细胞后，能显著抑制其Acrp30mRNA和蛋白表达。结论 构建的Acrp30基因特异性 siRNA腺病毒 载体能有效的抑制脂联素基因在 3T3一L1脂肪细胞中的表达。 关键词：RNA干扰 ；腺病毒载体；脂联素；3T3．L1细胞 中图法分类号：R329．25；R394—33；R394．2 文献标识码：A Effectsofrecombinantadenovirus-mediated siRNA on adiponectin expression in 3T3．L1cells MENGFanp·ing，YANGGang—yi，LIKe，LILing，QIXiao—ya，LIUJian—lei，LIRong (Depanment。fClinical Biochemistry，KeyLaboratoryofLaboratory MedicalDiagnosticsofMinistry ofEducation，FacultyofLaboratory Medicine Chongqing ， 400016； DepartmentofEndocrinology，TheSecondAffiliatedHospital，Ch。ngqingMedica1UniveIsity， Chongqing400010，China) Abstract：Objective ToconstructtheRNAinterferedadenovirusexpressionvectorspecificforAdip0ne— ct