无痛麻醉下枪式肝穿活检术在食蟹猴肝纤维化模型研究中的应用.pdfVIP

第十一届中南地区实验动物科技交流会论文集 [1] 肝纤维化是大多数慢性肝病向肝硬化发展所必经的共同病理过程 ，鉴于其可逆性的特 点，目前认为防治肝纤维化可能是攻克肝硬化的突破口之一。肝纤维化发生机制至今仍未完 全阐明，因此，建立食蟹猴肝纤维化动物模型、开展肝纤维化发病机理研究，并依此建立抗 肝纤维化药物研究服务平台，对慢性肝病的防治意义重大。肝组织病理学检查是明确诊断、 衡量炎症活动度及判定药物疗效的金标准，B超引导下经皮肝脏穿刺活检术是目前临床上最 为常用的肝组织病理取材方法，具有损伤小、安全性高、操作简单和操作迅速等特点。与啮 齿类实验动物相比，非人灵长类动物较大的体型优势可为该项操作技术的实施提供可能性， 使研究者有望对肝纤维化模型的建立进行全程实时、动态的病理监测。本研究将初步探讨无 痛麻醉下枪式肝穿活检术在建立食蟹猴肝纤维化动物模型研究中应用的可行性及价值。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 试剂与仪器 主要试剂：四氯化碳（CCL4 ）购自西陇化工股份有限公司，批号 100811；小牛血清 （heteroimmunity ）购自杭州市江滨生物技术有限公司，批；百年喜运酒（Alcohol ， 50 度）购自贵州省怀仁市茅台镇酒城酒业有限公司，生产批号； Weigert苏术素 液购自上海懿洋仪器有限公司；盐酸氯胺酮购自福建古田药业公司，批号 101221；丙泊酚 购自阿斯利康公司，批号GY957 ； M7 便携式超声仪为深圳迈瑞公司生产；枪式活检枪由巴德医疗器械有限公 主要仪器： 司生产；18G一次性肝穿针由迈能公司生产；CX4 型血生化仪为贝克曼公司生产；MICROS-60 型血球仪由ABXDIAGNOTICS生产。 1.1.2 实验动物 食蟹猴由广西玮美生物科技有限公司提供，雄性，年龄 4-7 岁，体重 5-8kg 。经适应性 饲养 14d，B 超检查肝脏，检测血液学、凝血功能、肝脏生化功能等指标未见异常。动物随 机分为对照组、异种血清组、四氯化碳组、酒精组，每组动物 6 例。所有动物均饲养在不锈 钢单笼中，自由饮水，每天饲喂颗粒饲料 4 次，每天饲喂苹果半个。环境温度控制在 16-26℃， 湿度 40-80% ，光照时间为 12h/12h。 1.2 实验方法 1.2.1 食蟹猴肝纤维化模型建立 适应期过后，根据动物分组进行给药。CCL 组灌服CCL 花生油混合液（按 1：1 比例 4 4 混合），剂量为 1.6ml/kg·bw；异种血清组皮下注射小牛血清，剂量为 0.4ml/kg·bw ；酒精组 灌服 50 度白酒，剂量为 0.8ml/kg·bw ；对照组不给予任何处理。所有模型组每周处置两次。 1.2.2 无痛麻醉术 动物禁食 12 小时，禁饮 2 小时。术前予肌注氯胺酮，剂量为 1~1.5mg/kg，动物进入麻 950 第十一届中南地区实验动物科技交流会论文集 醉状态后，将动物进行仰卧位固定。通过留置针静脉推注丙泊酚，剂量为 1~2mg/kg，观察 动物入睡，睫毛反射消失，呼吸平稳，开始进行消毒和穿刺检查。期间密切注意动物呼吸、 体温、心率及对疼痛敏感度的变化，动物肢体或头部微动时，通过静脉追加丙泊酚 1~2 ml。 1.2.3 B 超引导下枪式肝穿活检术 动物仰卧位，固定四肢及头部 18G 穿刺针装枪备发，将取材标本长度设定为 1.5cm。常 规消毒穿刺部位皮肤，铺无菌孔巾。B 超下定位，于右侧腋中线 9-10 肋间确定穿刺位点。 肝穿针进皮后缓慢进针，深度约为 1.2~1.5cm，B 超确认针尖已进入肝实质无误后，击发活 检枪取材并迅速退出。穿刺部位消毒以无菌纱布按压 2～5min 。将抽吸的肝组织注入 10％ 甲醛固定液中及时送检。穿刺过程中通过实时超声图像可观察到活检针的进针路径，可见其 形成一短条状强回声带。 1.2.4 肝穿活检组织 VG 胶原染色 常规脱水包埋，连续 3μm 组织切片脱蜡，梯度乙醇水化，PBS 冲洗，Weigert 苏术素液 染 5min ，冲水，苦