体外诱导人骨髓多能成体祖细胞向肝样细胞分化的实验的研究.pdfVIP

．212． 现代消化及介入诊疗2005年第lO卷增刊ModemDigestion＆Intervention2005，V01．10，Suppl 体外诱导人骨髓多能成体祖细胞向肝样细胞 分化的实验研究 高毅 慕宁 唐力军 骨髓源干细胞具有多向分化潜能【Ⅷ。特别是具 CKl8、 有向肝脏干细胞、肝细胞及血管内皮细胞分化的潜 Mouse-Anti-Human 能【4l。由于其取材方便，可以来自患者自身，无排斥 反应．具有重要的临床应用价值，因此成为当前肝组 剂盒、DAB显色试剂盒、AEC显色试剂盒均购自福 织T程学中的一大热点。CatherineM．Verfaillie工作 州迈新生物技术开发公司。LA—Taxi酶、PCR引物设 组从骨髓中分离出的多能成体祖细胞(multipotent计、DNA adult ceUsfrombone progenitor malTOW，MAPCs)的 可朔性越来越受到大家的关注IS-a]。本实验用免疫磁 activatedcell 进口分装)，DEPC(基因公司)，Beckman 性分离(magnetic sorting，MACS)方法 Epcs—XL stem cells， 流氏细胞仪(美国)，PTC-100PCR扩增仪(美国)。 分选骨髓间充质干细胞(mesenchymal 二、方法 MsCs)亚群MAPCs，在成功分离并培养MAPCs的 基础上．用细胞因子FGF-4、HGF及24小时70％肝1．人骨髓多能成体祖细胞的获取及培养 rabbit veinSelalmof 按临床常规骨髓穿刺操作取得临床健康志愿者 叶切除兔门静脉血清(The portal after24hours．RPVS)诱导其向肝髂骨内红骨髓5～20rIll。制成细胞悬液一次密度梯 70％hepatectomy 细胞方向分化。并采用不同方法鉴定细胞分化能力， 度离心，所获单个核细胞先加入自行配制的MAPCs M．Verfaillie 试图为HBAL及肝细胞移植等找到新的种子细胞培养基中贴壁培养一周．再按Catherine 来源。 等的方法嘲。分别用CD45、Gly—A微型免疫磁珠，进 行两次阴性选择得CD45一．Gly—A嘞j胞。台盼蓝拒染 材料与方法 试验计数MACS分选前后细胞活力(表1)。流式细 000 一、材料 胞仪检测细胞纯度[51。(附：IVIAPCs培养基(1 600 400 骨髓取自健康成年志愿者，L-02人肝细胞株购m1)配方：低糖DMEMml；MCDB一201ml； 自上海细胞生物研究所，实验用新西兰大白兔，2 胰岛素5mg；转铁蛋白100mg；牛血清白蛋白lg； 地塞米松0．03925 只，体重均约2500克，清洁级，雌雄不拘，由广州军 mg；硒仕钠0．05mg；抗坏血栓2一 磷酸盐25．62 区广州总医院动物实验中心提供。miniMA．CS