慢性铝暴露对小鼠学习记忆及tau蛋白磷酸化的影响.pdfVIP

6· 镕f目tH目№jEm《{H≈±々$日l÷＆jm 莽。染毒时问为1年。整十染谁期问，动物室“自#t”束光， l 6☆#MⅡ 空部数据月i±5表i，所有数据用STSS16 溢度18—23℃，％度ao％一6慨，清*，生静。所☆自‰Ⅻ“自由 0转件补折。 饮水自进☆。茏县、饮水‰等所有Ⅲ具，均f使nj☆≈制*。 组问№较月单目索女差分析及LSD进行m问＆鞍＆§虐准 1 4Moms$速}m＆ Ⅱ=0．05。 染毒结柬月进行Mqm水进宫试验。圜{口mⅫ舶为103cm， 高75cm．平台高度50cm，直＆10cm．平台低f床自lcm．水 2结果 温(22±2)℃。进宫上方安A带有Ⅱ示系统的摄像机．计算机2I Monis#*目#§镕￡ 自动跟踪计时并Ei游泳轨逮。宴验期问硅宫外垂Ⅲ物徉持T 检测结粜显i，2R*航试验中．各m小鼠}＆}台∞￥ 变。Moms水进宫Ⅻ试d序包括定位航行试验自’日探索试验均进*潜伏期都呈f降趋势，々H!H镕目№，中、高剂毋纽小 两个部分。试§前一*将小H放^水池巾({含平台)自由*鼠平均潜伏期明R延长．空问探索*验中．与对PdⅢ相比，中、 泳2min，使其熟悉进宫环境。 高剂盘m小鼠穿越平台次数明*碰’．差异均有统计学意R 【P005)．见表2。 定位导航试验(placenavigation)用f测日小鼠W水进宫学 日自Z忆的获取能力。小鼠连续接受4d训练每女4女．每敬 间隔20rain，记录小鼠分月姒4十{同蒙限^水点^水找到平 Table2 R^u1“ofMWM似tm 台所需的时q．目逃mⅫ平台上的潜恍期(escapinglatency)。4 改潜伏期成绩∞平目值作为肖日最终成琐进^虽后统计。如果 小鼠在lmln内未找Ⅻ平台．B4将其引l平台其措伏期按604 计算。 空目探索E验(s叫，■pmbetest)测盘小鼠学会；找平台 后，对平台李问位置E忆的保持能力。宴验第5*撤际平台． [t]‘-自目月n＆#(c枷p‘脚mn删刚P)．pO05。 从任一^水点将小鼠面向池壁艘^水中，让其自幽群泳E* 60 2．2§n十RBn‰g…§自十’au*自磷＆化*十 s内小鼠的游泳轨迹E泶60s内小鼠穿越平台的女数作为小 鼠的Z忆成绩。 ljhu蛋自厦磷＆化啪*自^t☆Ⅲ Ser396位点∞磷酸化表达，高剂量m、中剂量日、低剂量组明 Moms水进富∞验结束2d后．断头取脑m飒．口f一80％ 冻存．测定时取冷球的脑组织00lg加^目胞裂解液，球I：超 问无统计学＆异(P005)．见目1．3。 p破碎细胞，f4℃．10∞0rlmin离015…离。半《5￡m， J 2 ， 4 取上清，BCA试剂盘进行蛋白浓度的测定，之后Ⅷ整蛋自§同 hu5●_●●■-●■●■■-) 一浓度．测量调整好浓度蚤白样品的体积，然后与2倍浓度的 …^一一…一一‘● 上样缓冲液按体彀比l：l混勺．94％水滞煮沸5min。每孔J二 “”、Ⅲh；--。●_。。。‘J 样50嶂，10％的SDs_PAGE分离样品，80V电压电抹2h左右。 一。～小：J●-●—■●—l—I】 湿式转胰．恒流400mA，70mln将Ⅲ白转iPVDF膜上，月5％ 的牛奶封目涟封闭2h．一抗适当倍数稀释(E表1)，4℃孵育 {．n．mm，，。三i三一三壬壬i 过夜．002M rm PBST洗4攻，20rd攻．辣根R氧化酶标记白寸二 抗1 2000稀释，37℃孵育1h．0G2MPBST洗3趺，20min／次 Tm ECL显邑。采用捷遮801系，U＆腔电泳目缘分析系统对蛋白印 速方＆(Weslem blot)的结*进行分析，然目计算待测蛋白q Ⅷ“’一●_