小分子多元醇促进丝素蛋白结构的变化.pdfVIP

（4 ）特种功能材料 0 引言 再生丝素材料由于其良好的生物相容性、低的免疫原性及适度的生物降解性受到广泛的关注 [1] 和研究 。但是通过溶解丝素得到的溶液干燥所得到的丝素材料主要以无定形结构为主，结 晶区少，分子间结合力小，脆性而溶失率较大，几乎无实用价值。为了使得丝素材料能得到 更广泛的应用，其水溶性及脆性是亟待解决的问题。丝素蛋白一般认为有两种结晶结构： Silk I 与Silk II [2] 。Silk II 是反平行ß— 折叠结构,Silk I 是一种介于a-螺旋与ß-折叠之间的亚 [3] 稳态结构 。一旦丝素蛋白形成结晶结构，则可以制备得到水不溶性材料。丝素蛋白的结构 影响着力学性能、水溶性以及降解性能。一般的方法是制备丝素膜然后浸泡在甲醇或者乙醇 [4,5 ] 中以形成Silk II 结晶结构的丝素膜 。但是这样形成的丝素膜主要为Silk II 结晶结构，硬 而脆。如何以温和的方法控制丝素蛋白的结构，使其既能达到水不溶性，又能保持良好的生 物相容性，同时拥有良好的力学性能是迫切需要解决的问题。我们前期的研究发现甘油/丝 [6] 素蛋白共混后可以解决丝素蛋白的水溶性问题，并且可以得到力学性能优良的共混膜 。因 此本文研究其他多元醇对于丝素蛋白结构的影响。 1 材料与方法 1.1 丝素溶液的制备 取80g家蚕生丝放入5000ml浓度为 0.06%的碳酸钠溶液中，于98～100℃下煮三次， 三次均用去离子水，每次处理30 min，脱去生丝中的丝胶，洗净，拉松后放于60℃的烘箱 中烘干，即得纯丝素纤维。 将烘干所得的丝素纤维在65℃下溶解于9.3M的溴化锂溶液中，浴比为3 ：20 ，溶解时 间约 1h，待其冷却后取出装入透析袋置于去离子水中透析 3 天，用脱脂棉过滤得到纯丝素 溶液，放于4 ℃冰箱备用。丝素溶液浓度约为30 mg/mL 1.2 丝素/多元醇共混膜的制备 将多元醇配成浓度为 10 % （wt/v ）的溶液，取40 ml 丝素溶液，按多元醇质量/丝素质 量分别为0/100 ，2/100 ，4/100 ，6/100，8/100，9/100，10/100，12/100，14/100，20/100 ，30/100， 40/100 ，50/100，60/100 的比例向丝素溶液中加入相应体积的甘油溶液，混合均匀后倒入聚 苯乙烯塑料模具中，在室温下于通风橱中风干即得共混膜。 1.3 共混膜的结构测定 将共混膜加工成直径小于80µm 的粉末后，使用全自动X’PERT PRO MPD 射线衍射仪 （荷兰帕纳科公司(PANALYTICAL COMPANY) ），CuKa 射线，在管电压40Kv ﹑管电流35mA ﹑扫描速度10 （°）/min 的条件下，记录得到2?=5°～45°间的衍射强度曲线。 1.4 共混膜的溶失率 （4 ）特种功能材料 将共混膜在恒温恒湿（25℃，RH=65% ）下平衡24 小时，每个试样称取质量W1g 的样 品3 块，然后在烘箱中 105℃烘至恒重。称量得到W2 。 含水率＝（W1-W2 ）/W1×100% 。 另取共混膜样品，在恒温恒湿（25℃，RH=65% ）环境中平衡24 小时，然后准确称取 0.1g 左右得W1 ，放入锥形瓶中，按浴比 1：100 加入去离子水V ml （37℃水浴预热30 分 钟）后在37℃的水浴恒温震荡器中震荡24 小时，然后取出溶液。用Smartspec 型紫外分光 光度计测出溶液在278 nm 下的吸光度A。 共混膜的溶失率D （% ） =K A V / （1-W1*含水率）×100% K 为丝素溶液的紫外吸光常数，式中的K=1.1026 。 1.5 丝素膜的降解 将三种样品于去离子水中浸泡24h 后取出干燥，每个样品称取0.1 g 置入离心管中，分 别向其中加入 10ml 含有5 U/ml 的蛋白酶ⅩⅣ的PBS 溶液，放置于37℃的恒温培养箱中降 解。每天换液一次。在指定时间 1，2 ，3，4 ，5，6 和7 天时，每种样品取出三个测