银耳芽孢基因组DNA五种提取方法的比较.pdfVIP

维普资讯 248 2008,Vo1．29,No．06 食 品 科 学 ※生物工程 银耳芽孢基因组DNA五种提取方法的比较 刘 娟 ，马爱民 ，杨江涛2，李大方1 (1．华中农业人学食品科技学院，湖北武汉 430070；2．贵州大学生命科学学院，贵州贵阳 550025) 摘 要：采用酚仿法、CTAB法、蛋白酶K法、氯化苄法和盐析法五种方法分别提取银耳芽孢基因组DNA，用 吸光度估计DNA的纯度和得率、RAPD(随机扩增多态DNA)技术和限制性内切酶酶切反应评价DNA的质量。结果 表明：五种方法所提的DNA纯度及产率有差别，氯化苄法和蛋白酶K法的产率要高于另外三种方法，但CTAB 法所提DNA纯度最高。综合而言，CTAB法是五种方法中最为适合银耳芽孢基因组DNA提取的方法 。 关键词 ：银耳；芽孢；DNA提取；RAPD；限制性 内切酶酶切 ComparisonofFiveMethodsforGenomicDNAExtractionfromSporesofTremellafuciformis LIU Juan ，M A Ai—min一 ，YANG Jiang—tao ， LIDa—fang (1．CollegeofFoodSciencenadTechnology，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhna 430070，China 2．CollegeofLifeScience，GuizhouUniversity，Guiynag 550025，China) Abstract：DNAwasextractedfromsporesofTremellafucfiormisbyphenol—chloroformmethod，CTAB (cetyltrimethyl ammoniumbromide)mehtod，pmteinaseKmehtod，benzylchloridemehtod nadsaltingoutmehtodrespectively．Thepuriytnad yieldofhteDNAweredetemr inedbyA26o／A28orespectively．ThequalityoftheDNAwereevaluatedwithRAPD (rnadom amplifiedpolymerphicDNAtechnology)nadrestrictendonucleasedigestion．Resultsshowedhtathterealesomedifferencesin puriytnadyieldamonghtose5methods．Bohtbenzylchloridemehtod nadproteniaseKmehtod havebetteryield，buthtepuriyt ofhteDNA byCTABmethodisbetterhtna htatofohters．Inaword，hteCTAB mehtod ismostsuitableforexrtactniggenomic DNArfomsporesofTremellafuciformis． Keywords：Tremellafuciformis；spores；DNAextraction：RAPD：restrictionendonucleasedigestion 中图分类号：Q939．9 文献标识码：A 文章编号：1002．6630(2008)06．0248—04 银耳(TremellafuciformisBerk．1又称 白木耳，是一 由于银耳芽孢 以出芽生殖的方式进行繁殖，相对于菌丝 种高等担子菌，其予实体含有丰富的蛋 白质、多糖、 和子实体而言，能在较短时间内达到较大的生物量，因 不饱和脂肪酸及维生素等营养物质，可治疗气管炎、心 而在 DNA提取时可选用芽孢作为材料 。但是银耳芽孢 血管病 、糖尿病等多种疾病 ，素有 “菌 中之王 ”的 细胞壁结构比较致密，多糖和蛋 白等次生代谢产物的含 美称 i【]。已经研究开发出银耳糖