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36 福建医科大学学报 2012年 2月 第 46卷第 1期 人 EIF2B4基因一个新的可变剪接产物及其鉴定 周春燕，富显果，廖 娟，张 晓，张 朵，兰风华 摘要 ： 目的 对人 EIF2B4基因新的可变剪接产物进行鉴定 。 方法 应用长链 RT—PCR技术扩增人外周 血 EIF2B4基 因编码 区全长序列并进行 T克隆及序列测定，用常规 RT-PCR对新型可变剪接产物进行验证。 结 果 在 EIF2B4基 因转录产物中检测 出正常变异体 2和 3(两者只相差 3个碱基)，同时发现一个外显子 7缺失 26bp的转录产物 。 结论 利用长链 RT-PCR结合 T克隆一测序 的方法 ，发现人 EIF2B4基 因的一个新型可变剪 接产物。 关键词 ： 剪接体 ；内含子 ；真核细胞起始 因子 2B；基 因；逆转录聚合酶链反应 ；分子 ，克隆；序列分析 中图分类号 ： R329．2；R341；R394 文献标识码 ： A 文章编号 ： 1672-4194(2012)01-0036-03 可变剪接 (alternativesplicing)是 mRNA前体 下游引物 R：5GAGGGTAGGGAGTATGGCATT3 以不 同方式剪接 ，产生结构与功能不同的转录产物 25 L的反应体系 中含 cDNA模板 3 L、引物各 (variant)和蛋 白质异构体 (isoform)的过程 ，是调控 20pmol、4种 dNTP各 0．2mmol／L、2×GCbuffer 真核基因表达和丰富蛋 白质组多样性 的重要机制 12．5 L、TaqDNA聚合酶 2．5U。在 PCR扩增仪 之一 。已有的研究表 明，绝大多数人类基 因均可发 上进行 ，条件如下 ：94℃预变性 5min--~94℃ 30S 生可变剪接 。可变剪接与人类疾病密切相关_】]。 一61℃ 3Os一72℃ 2min，共 35个循环；最后一个 对于可变剪接转录产物 的鉴定研究，有助于认识可 循环 72℃延伸 10min。 变剪接的功能和作用。笔者实验 室采用长链 RT— Ej 基因 PCR及 T克隆一测序技术在人 EIF2B4基因可变剪 2a 2b 4a 4b 接的研究中发现一个可变剪接 3’位点可变剪接产 5H 6H 7H 8 9HlOH 1l l2 H 13 物，报道如下。 变异体l 1 材料和方法 变异l体2 1．1 试剂 全血 总 RNA 提取试剂盒 (QIAamp RNABloodMiniKit，德 国Qiagen公司)；RNA逆 变异体3 转录试剂盒 (美国 Invitrogen公司)；DNA胶 回收试 剂盒和 DNA分子量标准 (上海生工生物工程技术 外显子 4a比4b多 3个碱基． 图 1 人 EIF2B4基 因、mRNA变异体及 RT—PCR 引物 服务有限公司)；T克隆试剂盒 (pGEM—Teasy载体 设计示意 图 系统 ，美国Promega公司)；质粒抽提试剂盒 (Plas— Fig1 SchematicrepresentationofhumanEIF2B4gene， midMiniKitI，美 国 Omega公司)；Taq酶 (日本 mRNA variantsanddesignofPCR primers TaKaRa公司)；EcoR I酶 (英 国NEB公司)；PCR 扩增仪 (德 国Eppendorf公司)。 1．3 RT-PCR产物的T克隆一测序 RT—PCR产物 1．2 外周血长链 RT—PCR 参照文献E33，应用长 经纯化 PCR产物。依照