树突细胞体外扩增质量的影响因素研究.pdfVIP

· · 795 树突细胞体外扩增质量的影响因素研究 佟立新，刘树贤，段卫，刘静，解从君，李保欣 (河北医科大学第一医院肝病中心，河北石家庄050031) 关键词：肝炎，乙型，慢性；树突细胞；影响因素’ 000r／min离心 1：1稀释抗凝血，层加到淋巴细胞分离液，2 中图分类号：R512．62 文献标识码：B 文章编号：1004-583X(2007)11-0795—02 板中，于37℃，5％CO。饱和湿度下培养4小时，吸弃上清液， 乙型肝炎病毒(HBV)感染后，慢性化的形成与宿主的免 疫应答缺陷，尤其是细胞免疫功能低下，不能产生有效的细胞 kU／LrhGM—CSF和500kU／L rhlL一4的完全培养基，隔 毒性T细胞(CTL)反应，导致了HBV的持续感染。树突细 日换液，培养至第6天再加入终浓度为2．5 胞(DC)是功能最强的抗原提呈细胞和免疫反应的启动者，诸 多研究表明，采用特异性自体IX：疫苗回输治疗慢性乙型肝 炎可以取得较好的临床疗效[1]。本研究在寻找体外培养扩增 两次收获IX；并计数，备用。 DC最佳条件的同时，对宿主自身的影响因素作了观察，现报 1．4 告如下。 显且发亮，胞体折光性好，有成簇的IX：出现，且悬浮量较多， 1资料与方法 1．1病例选择选自我院肝病中心2004年5月至2005年 12月门诊与住院的HBV慢性感染者17例，男14例，女3 例，年龄20～60岁，平均(34．9土8．3)岁，其中慢性HBV携带 40％)。 者(未做肝穿)7例，慢性乙型肝炎10例。诊断标准符合2000 1．5统计学方法 年修订的《病毒性肝炎防治方案》[23全部受试者均不合并其他 作统计推断，全部资料均用SPSS11．5软件包处理。 肝炎病毒感染，亦不合并其他严重并发症。 2结果 Forma I．2仪器和试剂主要仪器：C02培育箱(Thermo 2．1树突细胞体外培养扩增外周血单核细胞贴壁4小时 美国)、倒置显微镜(Olympus日本)、流式细胞仪(Coultar美 后获得黏附细胞，加入细胞因子24小时后贴壁细胞减少，悬 国)、全自动酶标仪(Thermo芬兰)。主要试剂：重组人粒细 浮细胞渐增多，随培养时间延长至第6天呈积聚现象，并可见 胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素一4 到具有树突样突起(图1)。台盼兰染色细胞存活率达95％以 (rhlL-4)、RPMll640培养液、鼠抗人CD40和CD83单克