转基因玉米PCR检测体系的优化研究.pdfVIP

山东 农 业 科 学 2011，6：14—16，19 ShandongAgriculturalSciences 转基因玉米 PCR检测体系的优化研究 何春梅，张成华，刘 强，董 瑞，高新学，汪黎 明，刘铁 山 (山东省农业科学院玉米研究所 ，山东 济南 250100) 摘 要：以转基因玉米为研究材料 ，从模板DNA的提取质量、Mg2浓度、退火温度、引物用量等方面对 PCR检测体系进行优化，建立 了检测转基 因玉米 中外源基 因的有效 PCR反应体系。在优化体系 中， 25mmol／LMg2用量由1．5 l降低为 1．2txl，12．5mmol／L引物用量由1 降低为0．5 ，退火温度提高 2℃。TouchDownPCR反应条件：95℃5min；95oC1rain，62．5~C1min(以后每个循环递减 1 )，72oC 1min， 循环 15次；95oC1rain，57．5~C1rain，72oC1rain，循环20次；72oC延伸 7min。 关键词：转基因玉米 ；PCR扩增 ；反应体系 中图分类号 ：Q503 文献标识号：A 文章编号：1001—4942(2011)06—0014-04 OptimizationofPCR System forTransgenicM aize HEChun—mei，ZHANGCheng—hua，LIUQiang，DONGRui， GAO Xin—xue，WANGLi—ming，LIUTie—shan (M·aizeInstitute，ShandongAcademyofAgriculturalSciences，Jinan250100，China) Abstract With thetransgenicmaizeasexperimentmaterial，thePCR system fordetectingexogenous genewasoptimizedinextractedDNA quality，Mg“concentration，annealingtemperatureandprimerdosage． Inhteoptimizedsystem，htedosageof25mmol／LMg“wasreducedfrom 1．5 lto1．2 l；thedosageof 12．5mmol／Lprimerwasreducedfrom 1 lto0．5 l；hteannealingtemperaturewasincreasedby2cI：．The TouchdownPCRreactionconditionswere95℃ofr5min；95acofr1min．62．5ocofr1min(1℃ decreased aftereachcycle)，72~Cofr1min，15cycles；95~Cfor1min，57．5~Cfor1min，72~(2ofr1min，20cycles； and72℃ ofr7minofrfinalextension． Keywords Transgenicmaize；PCRamplification；Reactionsystem 玉米是集粮食、饲料和工业原料于一体的农 米新品种最现实、最具潜力的途径 。 作物，依总产和种植面积而言，为我国第一大粮食 目前玉米遗传转化方法中应用最多的是农杆 作物，也是我国未来增产潜力最大自l《粮食作物，在 菌介导的遗传转化，该方法具有外源基因的遗传 国民经济发展中占有举足轻重的地位 ¨J。据有 稳定性好、拷贝数低、高效快速经济等优点 。 关部门分析，按照当前国内玉米的产销形势，今后 但由于玉米基因组大、外源基因的拷贝数低 (如 5—10年，我国玉米将持续出现供不应求状况。缺 作者所在实验室利用该方法得到的转基因玉米的 口将达到6000万吨以上；同时，耕地持续减少、 外源基因拷贝数多为 1—2个)，使得外源基因的 人 口不断增加及畜牧业的更快发展，都给玉米生 检测变得复杂 一]。本研究即在前人 研究的