金银花类药材抗氧化活性成份的快速筛选和鉴定.pdfVIP

第四届全国大学生创新年会 The4thChinese Forum 2011年10月 Students。Creativity University 金银花类药材抗氧化活性成份的快速筛选与鉴定 张云吴琼张博朱鹃陈君· (中国药科大学，中药学院，江苏省南京市) 摘要： 金银花类药材有清热解毒、凉散风热之功效，用以治疗风热感冒、温病发热、痈肿疗疮、喉痹、丹 毒血痢等症。现代药理研究表明这些病症均与自由基的大量释放有关。现有研究表明金银花提取液具有较好 的抗氧化活性。本论文建立了一种基于色谱技术简便快速地从金银花类药材中筛选和鉴定天然抗氧化活性成 原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、芦丁、忍冬苷、异槲皮苷、木犀草苷和木 犀草素。这些活性成分为阐明金银花抗氧化活性的药效物质基础提供了实验依据。 关键词：抗氧化活性成分；金银花；快速筛选 机体每时每刻都在遭受内源或外源性自由基的侵袭，自由基平衡被打破后，自由基累积 会导致脂质过氧化、DNA损伤等，可损坏人体组织器官，加速机体的衰老进程并诱发癌症、动 脉粥样硬化、冠心病、神经性疾病、炎症等慢性疾病123，故抗氧化研究已引起广泛重视。 中药作为祖国传统医药的瑰宝，是一个巨大的天然化合物库。众所周知，中药组分复杂， 往往一种中药含有多类上百种成分，决定了从中筛选活性成分是一项及其艰巨的任务。目前 通行的方法是采用植物化学手段对中药中的化学成分进行分离纯化，然后对各成分进行活性 评价，最终寻找出活性成分。但该方法耗时耗力，效率极低。同时一些抗氧化活性成分也容 易在长时间的分离纯化过程中发生结构转变，或者转化为人工产物，导致活性减弱甚至消失。 现代药理研究表明，金银花提取液具有较好的抗氧化活性45口，而目前关于其抗氧化活性 组分的研究不多，故具有清除自由基作用组分的筛选鉴定对于金银花类药材抗氧化药效物质 基础的阐明均具有重要意义。本论文以金银花类药材为研究对象，以l，卜二苯基一2一三硝基 苯肼(DPPH)为活性筛选试剂，结合HPLC的高效分离能力以及DAD—TOF／MS的强大结构解析功能， 建立从金银花类药材中快速、简便筛选鉴定抗氧化活性成分的方法，为其药效物质基础的阐 明提供实验依据。 1实验部分 1．1仪器与材料 ii00LC／TOFMSD系统。数据采集与处理采用AppIiedBiosystems／MDS—SCIEX Agilent AnalystQs 327 第四届全国大学生创新年会 TheChinese 2011年10月 4th Forum UniversiWStudents‘C陀ativiW 系统制备(Millipore，USA)，其余试剂均为分析纯。金银花类药材：红腺忍冬08年采自广 西，华南忍冬08年采自广西，灰毡毛忍冬08年购自四川成都荷花池中药材市场，忍冬08年 采自封丘县黄德镇贾庄村和黄褐毛忍冬08年采自贵州兴义。以上药材经李萍教授鉴定为忍冬 属植物的干燥花蕾，凭证标本存放于中国药科大学生药学教研室。 1．2金银花类药材样品制备 精密称取经恒温干燥的金银花类药材粉末0．5 mL浸渍lh，超声提取45 g，70％甲醇15 rain，13000 r／min离心8min，取上清，于．20℃下避光保存、备用。 1．3溶液配制 mmol／L DPPH溶液配制：精密称取3．95DPPH粉末于2mL棕色容量瓶，定容即得5．0 mg 溶液，该溶液每天现用现配，．20℃下避光保存备用。 1．4金银花类药材中抗氧化成分快速筛选 分别吸取金银花类药材样品溶液150此与DPPH试液