大骨节病特异基因、蛋白的筛选及生物填充疗法疗效的研究进展.pdfVIP

其它研究 致病因子如何选择性地损伤人活体内成熟期软骨细胞的关键环节。 1．1大骨节病软骨细胞分化及调控基因的研究 大骨节病除经典的深层软骨细胞坏死等病变 外，还发现有软骨细胞“去分化”、胶原表型、甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)、TGF-t3、bFGF、 VEGF的表达异常，表明大骨节病的发生不但涉及软骨内化骨障碍还涉及软骨细胞终末分化障碍。 其特点为：软骨表层发生软骨细胞的“去分化”，以II型胶原合成减少和新合成I和Ⅲ型胶原为 特点，类似于纤维母细胞的表型，与既往用病区粮、水饲养小鼠中软骨基质中I型胶原增多， I型／Il型胶原之比增加相一致。软骨细胞终末分化障碍主要表现一。为患病儿童深层软骨细胞坏 死增多，X型胶原合成减少；二为晚期成人大骨节病软骨X型胶原表达呈增加趋势，软骨细胞 hormone-related 过早肥大。其次，大骨节病软骨甲状旁腺激素相关肽(parathyroid peptide。 ：PTHrP)：TGF-B 1、bFGF表达异常，与细胞坏死和分化有关。培养的大骨节病患者关节软骨细胞 进一步证实软骨细胞的“去分化”、提前肥大老化和细胞外基质蛋白的代谢异常。 1．2．大骨节病软骨细胞凋亡及其诱导途径 大骨节病儿童和成人关节软骨细胞凋亡及相关 调控因子Bc卜2、Bax、Fas、iNos表达较正常对照显著增多，以中层软骨细胞为显著，提示软 骨细胞凋亡已在增殖层中发生且有细胞凋亡信号出现；大骨节病与骨关节病关节软骨细胞凋亡 及相关调控因子Bcl一2、Bax、Fas及iNos表达均较对照组增多，但二者之间无显著性差异。大 水平增高相一致。近来又观察到大骨节病软骨细胞线粒体功能障碍。 1．3．大骨节病差异表达基因和蛋白的筛选 采用Agilent基因芯片发现大骨节病患者外周血 单核细胞的差异表达基因不同于正常者，其中上调和下调2倍以上的79个基因涉及代谢、细胞 凋亡、细胞增殖和细胞外基质降解等。最近又证实大骨节病软骨的差异表达基因不同于骨关节 病。其中显著差异的233个基因中大骨节病下调基因38个，上调基因195个，主要涉及软骨代 谢、离子通道蛋白、凋亡等方面，与既往大骨节病内源性硫代谢障碍、脂质过氧化和硒代谢障 碍等研究结果有一定的对应联系。采用ELDI／TOF邢蛋白组学芯片技术发现大骨节病患者 12 15886，5336，61m／z等16个树模型，特异度为88．89％，灵敏度为86．36％。采用软骨细 胞培养、双向凝胶电泳、质谱分析筛选血清差异表达蛋白标志不同于病区内、外对照与骨关节 病；由这3个蛋白组成的大骨节病疾病分类 出大骨节。 病软骨不同于正常对照的19个下调差异蛋白和10个上调差异蛋白，主要涉及软骨细胞应激 损伤、细胞运动、线粒体损伤和软骨胶原合成障碍，这些证据提示大骨节病发生发展中差异表 达基因和差异蛋白表达谱不同于病区和非病区正常人和骨关节病。因此，进一步确定大骨节病 软骨细胞坏死及其环境致病因子相关的特异性靶基因、靶蛋白和其生物学功能，将是深入解决 大骨节病发病机制的关键问题之一。 2．大骨节病家庭聚集性的原因及其易感基因的筛选与定位 随着分子生物学技术的迅速发展，近年来大骨节病病因发病机制已涉及大骨节病环境反应 基因的问题。我国先后调查表明大骨节病双亲和同胞的患病危险度比非血缘亲属高3-_4倍；大 骨节病多侵犯病区当地居住的农民，但也损害从非病区来的迁入者。辚游县14个自然村I，361 户10823例的调查证实，大骨节病分布呈明显的家庭聚集性，大骨节病先证者的同胞亲属患病 率为19．41％，明显高于当地人群10．90％的患病率，同胞对的遗传度为28．6l，分离比0．061， 小于0．25，遗传方差约占表型方差的I／3，表明遗传因素在大骨节病的流行中起一定的作用， 但明显弱于环境致病因素，符合环境因素为主的复杂性疾病。 linermixed 应用广义线性混合模型(generalized 模型，运用WinBUGS软件拟合大骨节病遗传方差分晕模犁分析185个包括父母和两个以上子女 的核心家系和193个扩展家系引起大骨节病家庭聚集性的主要原因是与环境危险因素有关，表 其它研究 现为同胞相关、亲子相关。人骨节病发病的主要原因可能足外环境因素及家庭共享环境效应， 加性遗传效应对其影响不大。