降糖三黄片对2型糖尿病大鼠胰腺β细胞BIP基因表达的影响.pdfVIP

全国第十九次仲录学说学术年会论文集 难点。降糖三黄片在临床上用于预防与治疗2型糖尿病及其并发症已多年。疗效明确。为进一步明 确作用机制，进行了其干预内质网应激介导的胰岛13细胞凋亡方面的研究。现将结果报道如下。 l材料和方法 1．1实验动物 选择体重509-一809 附属医院SPF级动物实验室内，自由进食，12h光照周期。 1．2试剂 显色试剂盒(博士德生物技术有限公司)。 1．3型糖尿病大鼠模型的建立、分组及给药方法 通饲料(总热量6．94J／g，其中蛋白质23％，碳水化合物53％，脂肪5％，广东省实验动物中心)喂养， l％比例添加，广东省实验动物中心)喂养，共喂养1个月。 链脲佐菌素腹腔注射造模阶段：分组喂养1个月后，禁食12小时，高脂饲料喂养组大鼠按 血糖116．7mmol／L，持续3d以上，且有多饮、多食、多尿现象表明造模成功纳入本实验，随机分为 冲液。造模后2型糖尿病足与降糖三黄片组各死亡2只大鼠，弃去。 模型建立确定后，降糖三黄片治疗组给予降糖三黄片787．5mg·kg-1．d一1灌胃，正常对照组与 2型糖尿病模型组给予等体积的蒸馏水灌冒。 1．4取材及指标检测 实验12周，大鼠禁食12h，称量体重后，用10％水合氯醛麻醉，腹主动脉采血后，摘取胰腺， 置于10％福尔马林中l古I定，用以免疫组化研究。 1．5胰腺免疫组化检测 Wistar大鼠胰腺甲醛同定、修块、流水冲洗、脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋后，石蜡切片。常 规脱蜡、水化，抗原修复，滴加适当稀释的一抗CHOP、BIP，空白对照滴加PBS，4℃冰箱过夜。恢 复室温，0．01MPBS(PH7．2—7．4)冲洗3次，每次2gin，滴加生物索化二抗，37℃孵育20min，PBS 洗3次每次2min。滴加链霉索化亲和素试剂，37℃孵育20min，PBS洗4次每次5min。二氨基联 苯氨(DAB)显色：苏木素复染、脱水、透明、中性树胶封片。每张随机选取20个视野，用病理图像 分析系统进行分析。 1．6统计学处理 应用SPSSl6．0软件进行统计分析，计量资料J{Ji±s表示，多组问比较采刚单冈素方差分析， PO．05为差异有统计学意义。 {l{l景医学求真·实验研究 2实验结果 2．1大鼠的一般情况 在高脂饲料期间，高脂饲料喂养的大鼠体型肥胖，皮毛光滑，光泽度好，与正常对照组大鼠相 比，体重明显增加。腹腔注射STZ后并确定造模成功之后的整个实验期间，与正常对照组相比，2 型糖尿病模型组大鼠多饮、多食、多尿、消瘦症状明显，体重较前明显下降，精神状态差，易激惹， 皮毛颜色加深变黄，无光泽，易出汗，尿色深黄，大便干结、量少。降糖三黄片治疗组大鼠上述症 状稍改善，尤其精神状态、皮毛颜色、光泽度、大便干结程度与数量明显优于2型糖尿病治疗组， 平均进食量、进水量较2型糖尿病治疗组减少。 2．2造模后1周，各组大鼠体重、血糖、胰岛素水平(表1) 造模1周后抽血测空腹血糖，造模组大鼠血糖明显升高，与正常对照组相比有显著性差异 (PO．05)，说明2型糖尿病模型成立并稳定。造模各组存在明显的高胰岛素血症，胰岛素敏感指数 下降，同正常组相比具有显著性差异(P0．05)，说明存在明显胰岛素抵抗。 表1各组体重、空腹血糖、空腹胰岛素差值比较(i±s) 注：·代表与正常组比较PO．01 2．3降糖三黄片治疗前后大鼠体重、空腹血糖、空腹胰岛素改变(表2) 实验后，降糖三黄片治疗组大鼠体重上升明显，实验前后均数差值有统计学意义(P0．01)；FBG 下降明显，实验前后均数差值有统计学意义(P0．01)；血清胰岛素含量下降明显，实验前后均数差 值有统计学意义(PO．01)(见表2) 表2降糖三黄片治疗组实验前后各项指标均数比较(i±s) 表3各组大鼠胰腺组织胰岛BIP平均光密度值 注：·与正常组比较，PO．05；。与模型组比较，PO．05 2．4胰岛13细胞BIP基因表达的影响 本实验结果显示，胰岛BIP刚性表达部位为胞浆(图1-3)。分析各纽平均光密皮值，组间采JH 357 辛目第1^∞仲乐学慌学术年0论t提 SPSSlB0Onc Way 度值较JL常组显菥降低；降触二黄片衍j，暂I肚岛FIIP平均光密度值均较