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高效液相色谱柱柱效测定 一、实验目的 1．了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理 2 ．学习高效液相色谱仪的使用 3 ．学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法 二、基本原理 高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法。当混合物随流动相流经色谱柱 时，就会与固定相及流动相发生作用。由于混合物中各组分在理化性质和结构上的差异，与 固定相及流动相间产生的作用力不同，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留 时间长短不同，随流动相先后从色谱柱流出，从而达到分离。配以适当的检测器可对不同组 分进行定性和定量分析。 色谱柱柱效评价可根据单位柱长的理论塔板数，即： tR 2 n 5.54( ) W 1/2 或 tR 2 n 16( ) W 式中：n-理论塔板数；t 为组分的保留时间；W -色谱峰半高宽度；W-色谱峰底宽 R 1/2 三、仪器和试剂 1. 仪器：Agilent 1100 高效液相色谱仪（紫外检测器） 2. 微量进样器 3. 试剂：甲苯（30 mg/L 甲醇溶液）；苯甲酸钠（30mg/L 水溶液） 四、实验条件 1. 色谱柱：ZORBAX SB-C 18 （4.6mm ID×15cm，5μm） 2. 流动相：甲醇:水（80:20 ）；流速：1.0 ml/min 3. 紫外光度检测器：波长254nm 4. 进样量：10 μl 五、实验步骤 1. 依次打开仪器和PC ，打开色谱工作站，编辑方法 2. 待基线平衡后即可进样 3. 分别吸取10μl 甲苯和苯甲酸钠溶液进样 4. 用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据 5. 冲洗色谱柱，关机 6. 根据理论塔板数公式，分别用甲苯和苯甲酸钠计算其理论塔板数 六、思考题 1．试比较本实验利用不同物质计算出的理论塔板数有何不同，为什么？ 2 ．紫外光度检测器是否适用于检测所有有机化合物，为什么？