应用RACE法分离与克隆猪GPX2基因研究.pdfVIP

安徽农业科学 ,Journal of Anhui Agri . Sci . 2008 ,36 ( 18) :7586 - 7588 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑 　刘长虹 　责任校对 　张敏 应用 RACE 法分离和克隆猪 GPX2 基因研究 1 ,2 1 ,2 2 1 ,2 2 赵 华 , 周继昌 , 李俊刚 , 赵 莹 , 王康宁 ( 1. 四川农业大学未来农业与人类健康研究中心 , 四川成都 625014 ;2 . 四川农业大学动物营养研究所 , 四川成都 625014) 摘要　[ 目的]运用分子生物学技术克隆猪 GPX2 基因。[ 方法] 以猪十二指肠总 RNA 为模板 ,根据人、大鼠、小鼠、牛、狗 GPX2 基因同源 序列分析 ,设计兼并引物对 ,采用 RT - PCR 技术扩增获得了1 段330bp 的猪 GPX2 基因序列。根据获得的已知序列分别设计引物 ,采用 3′RACE 和 5′RACE 技术手段分离、克隆猪 GPX2 基因。并对所得基因进行基因序列分析 。[ 结果] 该试验成功克隆分离了1 段长 924 bp 的mRNA 序列 ,该序列包含完整3′末端 ,与人、鼠、牛、狗 GPX2 基因具有较高的序列同源性 ,并在基因第 114 ～116 位置具有编码硒代半 ( ) ( 胱氨酸残基 Sec 的密码子 TGA 。[ 结论] 序列分析比对的结果表明克隆的基因就是猪 GPX2 基因 NCBI GeneBank 数据库序列号为 DQ98982) 。 关键词　基因克隆;猪 ; GPX2 ;RACE ;RTPCR ( ) 中图分类号　S821. 2 　　文献标识码　A 　　文章编号　0517 - 6611 2008 18 - 07586 - 03 Study on the Cloning and Isolation of sus scrofa GPX2 Gene by RACE Method ( ) ZHAO Hua et al 　 The Center of Future Agriculture for Human Health , Sichuan Agriculture University , Ya′an ,Sichuan 625014 Abstract 　[Obj ective ]Using molecular biotechnology to clone the sus scrof a GPX2 gene . [Method ] Using total RNA of sus scrof a duodenum as template , degenerated primer pairs were designed according to the homology alignment analysis of GPX2 gene of human , rat , mouse , dog and cattle . A sus scrof a GPX2 gene sequence of 330 bp was obtained by RTPCR application method . Primes were designed respectively according to the known sequence , sus scrof a GPX2 gene was isolated and cloned by 3RACE and 5RACE method and analyzed the gene sequence . [ Result ] A mRNA sequence of 924 bp was successfully cloned