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人脐静脉内皮细胞中C-型瞬时型感受器电位通道3RNA干扰质粒构建及筛选.pdf
第 31卷 第 4期 石河子大学学报 (自然科学版 ) Vo1．31 No．4
2Ol3年 8月 JournalofShiheziUniversity(NaturalScience) Aug．2013
文章编号 ：1007—7383(2013)040463—05
人脐静脉 内皮细胞 中C一型瞬时型感受器
电位通道 3RNA干扰质粒构建及筛选
王静 ，钟华 ，吴玲玲 ，赵慧 ，王腊梅 ，孙志萍。，庞丽娟。，何芳
(1石河子大学医学院病理生理教研室 ／新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室，石河子 832002；
2石河子大学医学院医学机能实验 中心 ，石河子 832002；3石河子大学医学院病理系 ，石河子 832002)
摘要 ：为 了探讨 c型瞬时型感受器 电位通道 3(TRPC3)在人脐静脉 内皮细胞 (HuVEC)中的作用 ，本实验针对
GenBank中人 TRPc3的cDNA序列设计合成短发卡 RNA(shRNA)，将其转染到 HUVEC中，在激光共聚焦显微
镜下观察细胞 的转染效率 ，实时定量 PCR和免疫 印记检测 TRPC3mRNA和蛋 白表达及转染后 的干扰效率 。结果
显示 ：(1)激光共聚焦显微镜下观察到绿色荧光 ，说 明已成功将 shTRPC3转人到 HUVEC 中；(2)转染 48h后用
G418进行稳定筛选后 ，TRPC3mRNA和蛋 白表达均降低(Po．05)，干扰效率分别为 71 和 74 。由此可知，在
HUVEC中成功构建 了TRPC3干扰质粒 。
关键词 ：内皮细胞 ；瞬时型感受器 电位通道 ；shRNA
中图分类号 ：R692．9 文献标志码 ：A
TheConstructionandScreeningofRNA InterferencePlasmidofC-Transient
ReceptorPotentialCanonical一3 in Human UmbilicalVeinEndothelialCells
WANG Jing ，ZHONG Hua，WU Lingling ，ZHAO Hui，WANG Lamei，
SUN Zhiping ，PANGLijuan。，HEFang
(1KeyLaboratoryofXinjiangEndemicandEthnicDiseases／SchoolofMedicine，ShiheziUniversity，Shihezi832002．China
2CenterofM edicalFunctionalExperimentsofShiheziUniversity，Shihezi832002，China；
3DepartmentofPhysioloy，M edicalCollegeofShiheziUniversity，Shihezi832002，China)
Abstract：To investigatetheeffectofC-TransientReceptorPotentia1Canonical一3(TRPC3)inhuman umbilica】vein endothelia1cells
(HUVEC)，thisexperiment，aimingatthecDNA sequenceofhumanTRPC3inGenBank，designedandsynthesizedthesmallhairpin
RNA (shRNA)andtransfecteditintoHUVEC．ThetransfectionefficiencywasdeterminedbylaserscanningconfocalmicroscoDv．and
theinterferenceefficiencyandexpressionofTRPC3mRNAandTRPC3proteinweredeterminedbyrea1timePCR andW esternblot
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